IGFBPrP1对肝星状细胞TGFβ1/Smad3及ERK1/2信号通路的影响及意义

摘要

研究背景：
　　 肝纤维化是各种原因引起肝损伤时发生的愈合反应，是慢性肝病发展为肝硬化的中间阶段。肝纤维化的发生是一个由多种细胞和细胞因子参与的复杂过程，肝星状细胞(hepatic stellate cells，HSC)是各种因子作用的主要靶细胞。细胞因子通过复杂的信号转导通路作用于HSC，其中包括经典的TGFβ1/Smad信号通路以及MAPK信号通路、JAK/STAT信号通路等。近年来MAPK信号通路在肝纤维化发生中的作用逐渐成为热点，其中细胞外信号调节激酶1/2（extracellular signal regulated kinase，ERK1/2）信号通路是研究的最为清楚的。ERK1/2信号通路可被多种细胞因子和有丝分裂原激活，进而调节HSC的生物学活性，其中包括最强的致纤维化因子转化生长因子β1（TGFβ1）。
　　 胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白1(insulin-like growth factor binding protein related protein 1，IGFBPrP1)是一种由多种细胞分泌的可溶性糖蛋白，其生物学功能尚未完全明确。导师刘立新课题小组前期研究发现IGFBPrP1在肝纤维化患者肝组织中的表达明显高于对照组，且与肝组织中TGFfβ1的表达呈正相关；腹腔注射IGFBPrP1可使野生型小鼠的肝组织发生肝纤维化，同时使其肝组织中TGFβ1、p-Smad2/3的表达均增加。
　　 那么，IGFBPrP1是否可激活体外培养的肝星状细胞的TGFβ1/Smad3信号通路和ERK1/2信号通路呢？目前尚未见报道。为了阐明上述问题，设计了本课题。
　　 第一部分IGFBPrP1对肝星状细胞TGFβ/Smad3信号通路的影响
　　 目的：
　　 探讨胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白1(IGFBPrP1)对肝星状细胞TGFβ1/Smad3信号通路的影响。
　　 方法：
　　 体外培养人肝星状细胞株（LX-2），设立空白对照组[加入等量磷酸盐缓冲液(PBS)]和IGFBPrP1处理组（加入终浓度为30μg/L的IGFBPrP1），作用24h后分别收集两组细胞培养上清液，并提取全细胞蛋白。采用Westernblot法检测细胞培养上清液中Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)、纤维连接蛋白(Fn)、转化生长因子β1(TGFβ1)以及LX-2细胞中Smad3、p-Smad2/3的表达变化。
　　 结果：
　　 1.IGFBPrP1对LX-2细胞CollagenⅠ和Fn表达的影响：IGFBPrP1处理组细胞培养上清液中CollagenⅠ和Fn的蛋白表达量较空白对照组显著增高(CollagenⅠ：0.68±0.07vs0.49±0.05，t=4.157，P＜0.05；Fn：0.54±0.07vs0.37±0.04，t=3.982，P＜0.05)，差异有统计学意义。
　　 2.IGFBPrP1对LX-2细胞TGFβ1表达的影响：IGFBPrP1处理组细胞培养上清液中TGFβ1的表达较空白对照组显著增高（035±0.05vs0.21±0.04，t=3.906，P＜0.05），差异有统计学意义。
　　 3.IGFBPrP1对LX-2细胞Smad3及p-Smad2/3表达的影响：IGFBPrP1处理组细胞中Smad3的表达与空白对照组比较无明显改变（0.65±0.05vs0.64±0.05，t=0.084，P＞0.05）；IGFBPrP1处理组细胞中p-Smad2/3的表达较空白对照组显著增高(0.70±0.05vs0.46±0.03，t=8.050，P＜0.05)，差异有统计学意义；IGFBPrP1处理组p-Smad2/3与Smad3的比值较空白对照组显著增高(1.10±0.12vs0.72±0.05，t=5.181，P＜0.05)，差异有统计学意义。
　　 结论：
　　 1.IGFBPrP1可使体外培养的LX-2细胞ECM的重要成分CollagenⅠ和Fn的分泌增加。
　　 2.IGFBPrP1可促进体外培养的LX-2细胞产生TGFβ1。
　　 3.IGFBPrP1可使体外培养的LX-2细胞中Smad3的磷酸化增加。
　　 第二部分IGFBPrP1对肝星状细胞ERK1/2信号通路的影响
　　 目的：
　　 探讨胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白1(IGFBPrP1)对肝星状细胞ERK1/2信号通路的影响。
　　 方法：
　　 体外培养人肝星状细胞株(LX-2)，设立空白对照组[加入等量磷酸盐缓冲液(PBS)]和IGFBPrP1处理组（加入终浓度为30μg/L的IGFBPrP1），作用24h后分别提取两组细胞的全细胞蛋白。采用Westemblot法检测LX-2细胞中ERK1/2、p-ERK1/2的表达变化。
　　 结果：
　　 IGFBPrP1对LX-2细胞ERK1/2及p-ERK1/2表达的影响：IGFBPrP1处理组细胞中ERK1/2的表达与空白对照组比较无明显改变（0.55±0.07vs0.54±0.05，t=0.286，P＞0.05）；IGFBPrP1处理组细胞中p-ERK1/2的表达较空白对照组显著增高(0.33±0.04vs0.17±0.02，t=7.538，P＜0.05)，差异有统计学意义；IGFBPrP1处理组p-ERK1/2与ERKI/2的比值较空白对照组显著增高（0.61±0.07vs0.31±0.04，t=7.535，P＜0.05），差异有统计学意义。
　　 结论：
　　 IGFBPrP1可使体外培养的LX-2细胞中ERK1/2的磷酸化增加。

目录

声明

第一部分 IGFBPrP1对肝星状细胞TGFβ1/Smad3信号通路的影响

前言

材料与方法

结果

讨论

第二部分 IGFBPrP1对肝星状细胞ERK1/2信号通路的影响

前言

材料与方法

结果

讨论

结论

参考文献

缩略词

综述

个人简介

致谢