siRNA沉默NR-f2基因对K562/G01细胞株伊马替尼耐药性的影响

摘要

目的：
　　 研究核因子NF-E2相关因子-2(Nuclear factor erythroid2-related factor2，Nrf2)在慢性粒细胞白血病伊马替尼耐药细胞株(K562/G01)及敏感细胞株(K562)中的表达情况;观察Nrf2-siRNA干扰K562/G01细胞株后Nrf2的表达及其对伊马替尼耐药情况的变化，以期为慢性粒细胞白血病(Chronic myelocyticleukemia，CML)的进一步治疗提供理论基础。
　　 方法：
　　 1)应用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)及Western bolt比较Nrf2在敏感细胞株K562和伊马替尼耐药细胞株K562/G01中mRNA及蛋白的表达水平;
　　 2)以慢病毒为载体，将Nrf2-siRNA目的基因转染K562/G01细胞，利用激光共聚焦显微镜(LSCM)及流式细胞术(FCM)检测转染后的效率，用RT-qPCR及Western bolt检测siRNA对Nrf2表达量的抑制效率;
　　 3)采用CCK-8比色法测定Nrf2-siRNA干扰前后细胞的耐药指数;FCM测定干扰前后伊马替尼对细胞凋亡率的变化。
　　 结果：
　　 1) Nrf2在K562/G01细胞株中的表达水平显著高于K562细胞株，差异有统计学意义(P＜0.05);
　　 2)转染Nrf2-siRNA后，K562/G01细胞中Nrf2 mRNA和蛋白的表达明显受抑，(P＜0.05); Nrf2 mRNA表达水平下调（66.3±0.42）％，Nrf2蛋白表达水平下调(65.82±2.36)％;
　　 3)成功建立了稳定低表达Nrf2的K562/G01细胞模型;
　　 4)转染Nrf2-siRNA后，K562/G01细胞对伊马替尼的耐药指数明显减小，K562/G01空白组、NC-GFP-LV对照组及Nrf2-RNAi-LV转染组的IC50分别为22.64μmol/L、21.37μmol/L、14.64-μmol/L，相应三组的耐药指数分别为34128、32.23、22.09。同样，FCM测得相同浓度伊马替尼作用下的细胞凋亡率显著增加，差异有统计学意义。CCK-8和FCM的结果表明，下调Nrf2可显著提高K562/G01细胞对伊马替尼的敏感性(P＜0.05);
　　 结论：
　　 Nrf2参与CML对伊马替尼耐药的发生;可通过沉默Nrf2来提高CML耐药细胞对伊马替尼的敏感性。

目录

声明

摘要

缩略词表(Abbreviation)

前言

1 材料

2 实验方法

3 结果

4 讨论

结论

参考文献

附图

综述

致谢

作者简历