3.0T MRI活体示踪BMSCs移植修复肾脏缺血再灌注损伤

摘要

1.目的： 1.1、研究骨髓间充质干细胞的形态及生长特征;并对其进行鉴定。 1.2、建立肾脏缺血再灌注损伤模型并移植SPIO标记BMSCs（经肾动脉及肾包膜下两种移植方法）;再利用MR活体示踪BMSCs，T2及T2*map图像定量分析。 1.3、综合评价BMSCs移植对肾脏缺血再灌注损伤的治疗疗效。 2.材料与方法： 2.1、实验对象 SD大鼠40只，雄性，5-6W,170-200g(山西医科大学实验动物中心提供)。 2.2、实验方法 MRI检查方法: SD大鼠分别于造模前、造模后1d、1w、2w、3w行磁共振扫描（采用Siemens Verio3.0T磁共振成像仪，水平卧位，头先进，行轴位T2WI、T2*WI、多回波T2序列及T2*序列扫描）。 细胞鉴定方法:采用流式细胞仪检测，CellQuestPlot软件分析数据;采用常规免疫荧光染色，用激光共聚焦显微镜观察。 SD大鼠造模3w后计算体重增长率、下腔静脉采血测定肾脏功能，取材进行组织切片及HE染色。 3.结果： 3.1、体外实验 采用全骨髓贴壁法成功分离BMSCs，免疫荧光法及流式细胞分析法鉴定细胞表型:CD34(-)、CD45(-)、CD44(+)、CD90(+); BMSCs能够成功地被诱导分化为成骨、成脂细胞。 3.2、MRI活体示踪 (1)肾脏IRI后MRI表现:损伤前，T2WI图像双肾大小基本对称、信号一致，而肾脏缺血再灌注损伤后左肾体积增大、信号增高;(2) T2*WI序列在体示踪SPIO标记BMSCs:1d时，两种不同方法低信号区（铁信号）均局限在注射局部，随着时间推移，肾动脉组左肾出现斑片状低信号区，而肾包膜下组低信号区仍部分局限于包膜下。(3)损伤组与治疗组（包括肾动脉组、肾包膜下组）T2值:损伤后，三组T2值均升高，最高点位于1d;随着时间推移，T2值有下降趋势，但两组治疗组下降幅度较损伤组大;在同一时间点，治疗组T2值低于损伤组，但两组治疗组之间差异不明显。损伤组与两组治疗组（肾动脉组、肾包膜下组）T2*值:损伤组T2*值趋势比较稳定，推测肾脏缺血再灌注损伤对T2*值影响不大;两组治疗组T2*值最低点均位于2w，在同一时间点，两组治疗组T2*值低于损伤组，但两组治疗组之间变化趋势不一致。 3.3、评价疗效 (1)比较三组体重增长率，由高到低依次为:对照组＞治疗组＞损伤组;(2)比较三组肾脏功能，尿素氮及肌酐升高水平由高到低为:损伤组＞治疗组＞对照组，治疗组间差异有统计学意义，肾动脉组较肾包膜下组水平低;(3)比较HE染色结果:对照组肾脏组织结构基本正常，损伤组大量肾小管上皮细胞肿胀、空泡变性，治疗组肾小管上皮细胞坏死程度较损伤组轻。 4.结论： 4.1、采用全骨髓贴壁法可以成功分离、培养BMSCs。 4.2、SPIO标记的BMSCs能够靶向迁移到肾脏缺血再灌注损伤区。 4.3、MRI T2WI及T2map图像能够显示肾脏缺血再灌注损伤后改变，T2*WI及T2*map图像能够活体示踪SPIO标记的BMSCs，但是两种移植方法无明显差异。 4.4、从体重增长率、肾脏功能及组织HE染色综合分析，BMSCs对肾脏缺血再灌注损伤有一定修复作用。

目录

声明

摘要

前言

材料与方法

第一部分 体外实验

1．骨髓间充质干细胞的分离、培养

2．骨髓间充质干细胞的鉴定

3．超顺磁性氧化铁标记骨髓间充质干细胞

4．结果

第二部分 体内试验

1．SD大鼠的分组

2．构建模型的过程

3．BMSCs移植的疗效评估

4．统计学方法

5．结果

讨论

结论

本实验的局限性及展望

参考文献

综述 磁性-荧光双标在干细胞示踪中的研究进展

附录

攻读学位期间发表论文情况

致谢

个人简历