光辉霉素对人胃癌BGC823细胞增殖、凋亡、迁移的影响及其机制

摘要

目的:观察光辉霉素(MithramycinA，MIT)对体外低分化人胃腺癌BGC-823细胞增殖、凋亡、迁移的作用，并初步探讨其分子生物学作用机制。 方法:体外培养胃腺癌细胞，配制不同浓度的含药培养基(MIT浓度分别为0μmol/L、0.15μ mol/L、0.3μ mol/L、0.6μ mol/L、1.2μ mol/L、1.8μ mol/L)。用倒置显微镜观察药物干预后细胞的生长状态。用Cell Counting Kit-8(CCK8)法检测药物对细胞增殖的作用;用流式细胞术分析药物对细胞凋亡程度的影响;用细胞划痕法检测药物对细胞迁移能力的影响;MIT干预胃癌细胞24h后，提取细胞内总的RNA量，用实时荧光定量PCR(real-time PCR)法定量分析Sp1和Hpa mRNA的表达量变化。 结果: 1.MIT对胃癌BGC823细胞生长状态的影响 光学显微镜下观察:胃癌细胞3-4小时后可贴壁，8-12小时后完全贴壁，12-24小时出现分裂增殖，细胞间相互连接，成片生长。空白组细胞生长活跃，形态饱满，胞质丰富，细胞间连接处形成亮线，药物干预组细胞形态变化，细胞皱缩，胞质内可见凋亡小体，细胞间连接不紧密，可见变性或坏死漂浮细胞。 2.MIT对胃癌BGC823细胞增殖的影响 CCK8结果示:0μ mol/L、0.15μ mol/L、0.3μ mol/L、0.6μmol/LMIT干预胃癌细胞24h后，不同浓度组增殖抑制率为1.7±0.015％、7.1±0.044％、28.9±0.072％、45.4±0.032％;干预48小时后，不同浓度组增殖抑制率对应为3.3±0.029％、13.5±0.006％、47.5±0.030％、68.8±0.038％，其间差异有统计学意义(P＜0.05)，而0.6μ mol/L、1.2μ mol/L、1.8μmol/LMIT作用后，不同组间胃癌细胞增殖抑制率无差异(P＞0.05);那么，MIT在一定浓度范围内，对胃癌细胞增殖的抑制作用随浓度的增加，作用时间的延长，抑制效果明显增强。 3.MIT对胃癌BGC823细胞凋亡的影响 流式细胞术分析表明，不同浓度药物处理胃癌BGC-823细胞24h后，细胞凋亡率的增加与药物浓度梯度有关，各组的凋亡率分别为2.1±0.985％、13.5±0.777％、21.5±0.874％、27.5±0.964％，各个浓度组两两比较，差异有显著性(P＜0.05)。 4.MIT对胃癌BGC823细胞迁移的影响 细胞划痕实验表明，不同浓度的药物作用细胞24h后，各组迁移率分别为12.9±0.02％、8.8±0.008％、4.0±0.013％、2.1±0.004％，药物作用48h后，各组迁移率分别为19.8±0.004％14.1±0.004％8.3±0.013％2.8±0.01％，随着药物作用浓度的增加，胃癌细胞迁移能力逐渐减弱，随着药物作用时间的延长，胃癌细胞的迁移作用增强(p＜0.05)。 5.MIT对Sp1、Hpa mRNA的影响 应用荧光定量PCR法检测药物作用前后Hpa和Sp1基因在胃癌细胞内表达变化;MIT可降低细胞中两者的表达量，随着药物浓度的增加，表达量的减少愈明显。实验组与对照组比较及实验组间比较，差异有显著性(p＜0.05)。而0.6umol/L、1.2umol/L、1.8umol/L干预后，两者基因表达量统计学均无差异。采用双变量直线相关性分析，表明Hpa和Sp1mRNA表达之间具有正相关性(r=0.898，P＜0.05)。 结论: 1.光辉霉素能够有效地抑制胃癌细胞的增殖和迁移，促进胃癌细胞凋亡，起到抗胃癌的作用。 2.光辉霉素能够下调细胞内Sp1和Hpa mRNA的表达，且两者表达高度正相关，提示Hpa是Sp1的下游产物。 3.光辉霉素作用于胃癌细胞后，细胞增殖、凋亡、迁移能力均发生变化，提示Sp1可能是多条信号通路的交叉点，可作为胃癌治疗的有效靶点。

目录

声明

摘要

主要缩略词表

前言

材料和方法

一、实验材料

二．实验方法

结果

1．光辉霉素对胃癌细胞BGC-823增殖抑制的量效和时效关系

2．光辉霉素对胃癌细胞凋亡的影响

3．光辉霉素对胃癌细胞迁移的影响

4．光辉霉素对细胞内Sp1和Hpa mRNA表达的影响

讨论

结论

参考文献

乙酰肝素酶在胃癌中的表达

个人简历

致谢