刺五加茎皮中黄酮的提取及其抗氧化功能研究

摘要

氧化应激是畜禽养殖中经常发生的问题，是造成畜禽抵抗力下降的重要诱因，严重的氧化应激反应甚至会危及畜禽的生命，对养殖业造成巨大的经济损失。人工合成的抗氧化剂虽然抗氧化性能良好，但是近年来对合成抗氧化剂的药理学研究过程中发现其具有一定的毒副作用，在机体内容易产生残留，对畜禽业的绿色、健康、可持续发展造成阻碍，因此研发天然植物的抗氧化成分，开发天然抗氧化剂成为抗氧化研究的重要方向。天然黄酮类化合物作为一种抗氧化性能良好的物质在动物的疾病预防保健中一直广受研究者的青睐，黄酮类化合物具有多种生物学活性，将黄酮类化合物的抗氧化性能应用于畜禽保健，还需要进一步得深入研究其对畜禽机体、细胞及分子水平上的抗氧化机理。 刺五加作为一种价格低廉，取材方便的中药材，具有强筋骨、补肝肾等作用，据研究发现，刺五加可以提高畜禽的免疫力、抗炎症、改善肠道的菌群及结构、减少幼龄畜禽的死亡率。为了深入研究刺五加茎皮黄酮的抗氧化性能，本试验通过研究刺五加茎皮黄酮的提取工艺，建立刺五加茎皮中提取的黄酮质量标准；以过氧化氢诱导损伤的鸡胚成纤维细胞（CEF）为模型，对刺五加黄酮的抗氧化性能展开研究，为临床应用提供理论依据，试验结果如下： 1、刺五加茎皮黄酮含量测定方法的建立：采用芦丁为标准品，以亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠显色法进行测定，成功建立的标准曲线回归方程如下所述：A=0.0115c-0.0064，R2=0.9995，精密性试验、稳定性试验、重复性试验和加样回收试验均符合药典标准。 2、响应面法优化超声波辅助刺五加茎皮中黄酮的乙醇提取工艺：采用超声波辅助乙醇提取工艺，通过单因素试验确定响应面的选择因素，通过BBD响应面优化最佳超声波辅助提取工艺，结果显示对刺五加茎皮中黄酮的提取工艺最佳条件为：在提取温度、提取功率、提取时间分别为65℃，399W，45min时，软件通过分析数据预测出的提取率最大值是3.756%。按最佳提取工艺进行三次验证试验，平均提取率为3.72%。 3、刺五加茎皮黄酮的体外抗氧化能力的评价：试验通过对刺五加黄酮的还原能力、DPPH自由基、超氧阴离子自由基、羟基自由基和ABTS自由基清除率的测定，以VC 作为对照，测定其体外抗氧化活性。结果显示在刺五加茎皮中提取的黄酮有很好的抗氧化能力，对DPPH自由基、超氧阴离子、过氧化氢、羟基自由基和ABTS自由基的清除率，IC50值分别为：2.305μg/mL、34.696μg/mL、5.489μg/mL、2.970μg/mL和9.256μg/mL。 4、刺五加茎皮黄酮对过氧化氢诱导CEF细胞氧化应激的预保护作用：培养鸡胚成纤维细胞（CEF），测定刺五加茎皮黄酮和过氧化氢的最大安全浓度；建立过氧化氢诱导损伤的CEF细胞模型，测定黄酮对过氧化氢诱导的氧化应激细胞的预保护效果，并检测细胞中抗氧化酶的活性。结果显示试验成功建立了过氧化氢诱导的CEF细胞的氧化应激模型，黄酮可以很好得预保护应激的CEF细胞，提高细胞的T-AOC及过氧化酶SOD、和GSH－Px的含量，降低MDA的含量，说明黄酮可能是通过调节抗氧化酶的含量起到抗自由基作用的。

目录

声明

英文缩略词表

前言

第一章 绪 论

1.1 研究进展

1.2 刺五加的生产概况

1.3 刺五加的化学成分

1.4 黄酮类化合物

1.5 氧化应激

第二章 刺五加茎皮黄酮含量测定方法的建立

2.1 试验材料

2.2 试验方法

2.3 试验结果

2.4 讨论

第三章 响应面法优化超声辅助提取刺五加茎皮黄酮工艺

3.1 试验材料

3.2 试验方法

3.3 试验结果

3.4 讨论

第四章 刺五加茎皮黄酮抗氧化作用研究

4.1 试验材料

4.2 试验方法

4.3 试验结果

4.4 讨论

第五章 刺五加茎皮黄酮对鸡胚成纤维细胞氧化损伤的保护作用

5.1 试验材料

5.2 试验方法

5.3 试验结果

5.4 讨论

结论

参考文献

致谢

攻读硕士学位期间发表的学术论文