不同氧浓度下吉非替尼对人肺癌细胞的影响

摘要

目的：
　　（1）研究低氧条件下，吉非替尼能否抑制人非小细胞肺癌细胞A549、HCC827、SK-MES-1的增殖。
　　（2）能否通过提高氧浓度改善人非小细胞肺癌细胞 A549、HCC827、SK-MES-1对吉非替尼的敏感性。
　　（3）研究在低氧、常氧、高氧三种不同氧浓度下，吉非替尼对这三种不同的细胞的作用是否有差异。
　　方法：
　　（1）本实验选用三个人非小细胞肺癌细胞株A549、HCC827、SK-MES-1为研究对象，采用Cell Counting Kit-8（CCK-8）法测定三株细胞对吉非替尼的敏感性。取处于对数生长期的上述细胞接种于96孔板，加入0μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、60μmol/L的吉非替尼，24小时分别置于低氧（5％）、常氧（21%）、高氧（40%）这三个不同氧浓度下，后加入CCK-85μL，通过多通道酶标仪检测各孔的吸光值A（波长=450nm，以波长520nm为参考）。并置倒置显微镜下观察，观察吉非替尼的诱导人非小细胞肺癌细胞凋亡作用。
　　（2）取0μmol/L、40μmol/L吉非替尼作用于处于对数期的A549、HCC827、SK-MES-1三种肺癌细胞，加药后24小时分别置于低氧（5%）、常氧（21%）、高氧（40%）这三个不同氧浓度，收集各组细胞备用。使用流式细胞仪通过Annexin V FITC-PI法测定各组细胞的凋亡率。普通PCR法和半定量RT-PCR法检测各组细胞EGFR、HIF-1α及VEGF-C mRNA的表达。
　　结果：
　　常氧、低氧及高氧条件下，细胞增殖抑制率随吉非替尼浓度的增加、氧浓度的升高而增加(P<0.001)。高氧条件下，与乏氧相关的HIF-1αmRNA在高氧条件下三种细胞均明显减弱(P<0.05)，而VEGF-C mRNA、EGFR mRNA在HCC827细胞实验组可见随氧浓度升高表达量下降(P<0.05)。
　　结论：
　　（1）低氧条件下，吉非替尼可以抑制人非小细胞肺癌细胞A549、HCC827、SK-MES-1的增殖。
　　（2）提高氧浓度，人非小细胞肺癌细胞株A549、HCC827、SK-MES-1对吉非替尼的敏感性均提高，且以HCC827细胞株为著。
　　（3）在低氧、常氧、高氧三种不同氧浓度下，吉非替尼对这三种不同的细胞的作用是有差异。可能机制是提高氧浓度可以进一步下调活化的HIF-1αmRNA的表达。

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前言

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.2 实验方法

1.3 统计学分析

2 结 果

2.1 CCK-8实验检测各实验组的增值变化

2.2 常氧、低氧和高氧条件下，吉非替尼对人肺癌A549、HCC827、SK-MES-1细胞株的凋亡作用

2.3常氧、低氧和高氧条件下，吉非替尼对人肺癌A549、HCC827、SK-MES-1细胞株各基因mRNA 的表达结果

3 讨 论

4 结 论

4.1 低氧条件吉非替尼对人肺癌细胞的影响

4.2 不同氧浓度下吉非替尼对人肺癌细胞的影响

参考文献

综述:肿瘤微环境和肿瘤异质性的分析

致谢

在学期间承担/参与的科研课题与研究成果

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