致动脉粥样硬化过程中不同表型的巨噬细胞对泡沫细胞形成的影响及机制

摘要

目的：
　　探讨致动脉粥样硬化过程中，M1和M2型巨噬细胞对泡沫细胞形成的影响及相关机制。
　　方法：
　　提取C57 BL/6小鼠骨髓单核细胞，用巨噬细胞集落刺激因子（ macrophage colony-stimulating factor,M-CSF）诱导其分化成巨噬细胞，并分别给予刺激因子干扰素γ（ Interferon-γ,IFN-γ）加脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)和白细胞介素-4（Interlukin-4,IL-4）使得巨噬细胞分化成M1和M2型，通过 RT-PCR方法来检测极化后 M1型的标志一氧化氮合成酶（Inducible nitric oxide synthase,iNOS）和M2型的标志精氨酸酶-1（Arginase-1,Arg-1）在mRNA水平的表达，对巨噬细胞的表型进行鉴定。在诱导分化成功的两类细胞中均加入40mg/L ox-LDL，孵育48h，行油红O染色观察两类细胞的泡沫细胞形成情况；用高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)检测细胞内的总胆固醇(total cholesterol,TC)、游离胆固醇( free cholesterol,FC)及胆固醇脂(cholesterol ester,CE)的含量；行 RT-PCR及Westernblot分别检测巨噬细胞清道夫受体CD36及SR-A1在mRNA及蛋白水平的表达情况；行Westernblot检测内质网应激(endoplasmic reticulum stress, ERS)的标志性分子糖调节蛋白78(glucose-regulated protein78,GRP78)和GRP94的表达。
　　结果：
　　RT-PCR结果示Arg-1的表达在IFN-γ加LPS处理组低于IL-4处理组。而在IL-4处理组iNOS的表达较IFN-γ加LPS处理组低,表明经IFN-γ加LPS刺激使得巨噬细胞分化成M1型而经IL-4刺激使得巨噬细胞分化为M2型；油红O染色结果示：阳性细胞在IFN-γ加LPS处理组中较IL-4处理组少；细胞里脂质量测定示：M1型细胞内TC、FC及CE的含量低于M2型(P<0.05）。与M1型相比较，M2型高表达清道夫受体CD36及SR-A1；在M2型巨噬细胞上内质网应激的标志糖调节蛋白78和糖调节蛋白94的表达均高于M1型巨噬细胞。
　　结论：
　　给予40mg/L ox-LDL刺激后M2型巨噬细胞较M1型更易形成泡沫细胞。可能机制是ox-LDL刺激后M2型巨噬细胞的ESR更易于被激活，从而使得M2型巨噬细胞表达的清道夫受体CD36及SR-A1高于M1型。以上结果导致M2型巨噬细胞对ox-LDL的吞噬量高于M1型，从而使得M2型较M1型更易形成泡沫细胞。

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前言

1 材料和方法

1.1 实验材料

1.1.1实验动物

1.1.2主要试剂及来源

1.2实验方法

1.2.1巨噬细胞的分离及培养

1.2.2细胞计数

1.2.3细胞爬片

1.2.4实验分组

1.2.5巨噬细胞RNA的提取及巨噬细胞表型的鉴定

1.2.6油红O染色

1.2.7对巨噬细胞内脂质含量进行测定

1.2.8行RT-PCR检测CD36和SR-A1的表达

1.2.9行Western blot检测CD36、SR-A1、GRP78和GRP94的表达

1.3 统计学方法

2 结 果

2.1 结果一

2.2 结果二

2.3 结果三

2.4 结果四

3 讨 论

4 结 论

参考文献

综述: M1/M2型巨噬细胞在动脉粥样硬化的免疫机制研究

致谢

在学期间承担/参与的科研课题与研究成果

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