氟对大鼠肾小管上皮细胞的毒性作用及硒干预机制的研究

摘要

目的：
　　本课题主要以大鼠肾小管上皮细胞为研究对象，采用单氟、单硒及硒氟联合培养细胞，旨在探讨硒对氟诱导大鼠肾小管上皮细胞的拮抗作用和相关机制的研究。
　　方法：
　　肾小管上皮细胞经不同浓度氟、硒和硒氟联合染毒培养48和72 h后，运用MTT法检测细胞增殖情况；观察细胞形态结构变化运用HE染色法；采用流式细胞仪检测细胞凋亡和线粒体膜电位的变化；运用试剂盒检测细胞培养液中氧化应激酶的活性；Real-Time PCR检测凋亡相关因子Caspase-3、Caspase-9、Bax和Bcl-2 mRNA表达水平；Western-blot免疫印迹检测Caspase-3、Caspase-9、Bax和Bcl-2蛋白表达水平。
　　结果：
　　1．染氟48、72和96 h时，染氟组5 mg/L、10 mg/L、20 mg/L和40 mg/L均对细胞增殖呈抑制作用。低浓度染硒组能够促进细胞增殖，高浓度染硒组能够抑制细胞的增殖。与等剂量染氟组相比，硒干预组细胞增殖显著加快。
　　2．显微镜下观察细胞形态结构，对照组细胞生长正常，形态自然，细胞排列紧密；染氟组细胞体积增大，细胞间隙变宽，连接不紧密，出现多核现象，异常细胞数量增多；染硒组细胞形态与对照组大致相近；与等剂量染氟组相比，硒干预组细胞形态趋于正常。
　　3．细胞培养液中氧化应激指标检测结果显示，随染氟浓度的升高，细胞培养液中SOD、CAT、T-AOC和GSH-PX的活性逐渐降低；NO和MDA含量逐渐增多。染硒组差异不明显。与等剂量染氟组比，硒干预组中SOD、CAT、T-AOC和GSH-PX活性均升高；NO和MDA含量均降低。
　　4．细胞凋亡和线粒体膜电位变化，随染氟浓度的升高，凋亡率升高，线粒体膜电位降低；染硒组细胞凋亡率和线粒体膜电位无明显变化；与等剂量染氟组相比，硒干预组细胞凋亡率显著降低，线粒体膜电位显著升高。
　　5．凋亡相关因子mRNA表达情况，随染氟浓度的升高，除Bcl-2 mRNA表达水平降低外，其他凋亡因子Caspase-3、Caspase-9和Bax mRNA表达水平显著升高。与等剂量染氟组相比，硒干预组Bcl-2 mRNA表达水平升高，而Caspase-3、Caspase-9和Bax mRNA表达水平都显著降低。
　　6．凋亡相关因子蛋白表达测定结果，与对照组比较，随染氟浓度的升高，Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9和Bax蛋白表达上调，而Bcl-2蛋白表达下调。染硒组无统计学意义。与等剂量染氟组相比，硒干预组Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9和Bax蛋白表达下调，而Bcl-2蛋白表达上调。而各组中pro-Caspase-3和pro-Caspase-9蛋白表达没有明显变化。
　　结论：
　　1．硒对氟诱导的大鼠肾小管上皮细胞凋亡有拮抗作用。
　　2．硒可以通过调节抗氧化酶活性，提高机体抗氧化能力，加快自由基的清除，使细胞免受氧化损伤。
　　3．硒可以通过调节凋亡因子Caspase-3、Caspase-9、Bax和Bcl-2的表达，抑制凋亡信号传导，从而拮抗细胞凋亡。

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前言

第一部分 硒对氟诱导大鼠肾小管上皮细胞增殖和形态结构的影响

1 材料与方法

2 结 果

3 讨 论

4 结 论

第二部分 硒对氟诱导大鼠肾小管上皮细胞氧化应激的影响

1 材料与方法

2 结 果

3 讨 论

4 结 论

第三部分 硒对氟诱导大鼠肾小管上皮细胞凋亡和线粒体膜电位的影响

1 材料和方法

2 结 果

3 讨 论

4 结 论

第四部分 硒对氟诱导大鼠肾小管上皮细胞Caspase-3、 Caspase-9、Bcl-2 和Bax mRNA 和蛋白表达的影响

1 材料和方法

2 结 果

3 讨 论

4 结 论

参考文献

综述:氟对大鼠肾小管上皮细胞的毒性作用及硒干预机制的研究进展

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