重组人粒细胞集落刺激因子对大鼠脑缺血再灌注损伤后AQP4和GFAP表达的影响

摘要

目的：
　　采用SD大鼠大脑中动脉缺血再灌注(MACO/R)损伤模型，给予重组人粒细胞集落刺激因子（Recombinant human granulocyte colony stimulating factor，rhG-CSF），观察脑组织中水通道蛋白-4（ Aquaporin-4，AQP4）及胶质纤维酸性蛋白（（Glail Fibrillary Acidic Protein，GFAP）合成后数量的改变及对血脑屏障的实质性结构和EB渗出量的变化，探索和明确rhG-CSF对血脑屏障的作用。
　　方法：
　　将雄性清洁健康SD大鼠39只随机分为：假手术组、模型组和治疗组，每一组有13只大鼠，利用改良Long尼龙鱼线栓塞法完成MACO动物模型的建立，治疗组于栓塞后2h即开始拔出线栓,同时于拔出线栓的即刻和整一天后分别给予rhG-CSF（50μg/kg）用注射器注入腹部皮下，另两组给予一样体积的0.9％氯化钠注射液。在重新恢复血流48小时后采用Longa5分制评分标准进行神经功能评分；每组中6只利用分光光度仪计算大脑左右半球脑组织内EB的质量，评价BBB结构完整性的损坏程度；每组中6只利用免疫组化法测定每一组大鼠脑内AQP4、GFAP合成含量改变；每组1只大鼠电镜下制作超薄电镜切片，用来观察BBB的超细微结构。
　　结果:
　　1.假手术组没有出现任何肢体偏瘫及精神状态的改变，故神经功能评分为0分，剩余两组都可以观察到大鼠的肢体活动和精神状态出现了一定程度变化，如对侧肢体活动不利、活动度降低及不愿意进食，而治疗组左侧肢体的活动及精神状态都得到了一定程度的好转，偏瘫肢体活动及活动度增大，治疗组（1.31±0.63）与模型组（2.46±0.66）差异有统计学意义(P<0.01)；
　　2.分光光度仪比色法测定三组大鼠左侧大脑EB含量无明显差异（P=0.431）。与左侧脑组织中伊文思蓝含量比较，模型组与治疗组右侧脑组织中含量差异有统计学意义（P<0.05）；与假手术（7.38±2.72）相比较，模型组EB的含量（37.11±3.06）明显增多(P<0.05)，治疗组EB的含量（22.75±3.00）较模型组降低(P<0.01)。
　　3.假手术组偶见有AQP4及GFAP阳性细胞的表达，治疗组AQP4、GFAP在缺血核心区（皮层及纹状体）表达的灰度值[分别为(180.67±7.72)(160.64±5.07)]均较模型组增高[(t=-24.16，P<0.01)(t=-17.98,P<0.01)]；假手术组大鼠脑组织AQP4、GFAP表达的灰度值[(分别为（202.08±5.80)（173.73±4.40）]高于模型组（分别为t=46.07， P<0.01；t=31.07，P<0.01）。
　　4.电镜下观察，假手术组内皮细胞之间连接十分紧密，结构清晰，毛细血管形态规则，内皮细胞核无肿胀、固缩，,基膜厚薄均匀。模型组大脑毛细血管内皮细胞间连接松弛，缝隙增宽，基底膜电子密度降低，周围正常脑组织严重破坏；与模型组比较，治疗组包括连接较紧密、基底膜电子密度、周围正常脑组织都得以改善。
　　结论:
　　1. rhG-CSF可促进IRI后肢体功能的康复。
　　2.rhG-CSF可改善再IRI后BBB的通透性，缓解损伤早期脑水肿的形成与发展。
　　3.推测其可能机制为rhG-CSF通过抑制星形胶质细胞过度活化，下调GFAP、AQP4的表达，减轻脑水肿,从而保护血脑屏障完整性。

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前言

1 材料和方法

1.1 实验材料

1.2 实验方法

2 结 果

2.1 大鼠神经功能缺损评分

2.2 EB含量的测定

2.3 脑缺血再灌注后AQP4和GFAP的表达

2.4 电镜下观察血脑屏障

3 讨 论

4 结 论

参考文献

综述: rhG-CSF对大鼠脑缺血再灌注损伤后血脑屏障的保护机制

致谢

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