温度敏感性瞬时受体通道M4在人类膝关节软骨退变中的表达及意义

摘要

目的：
　　检测在人关节软骨中是否表达温度敏感性瞬时受体通道TRPM4，探讨其在不同年龄正常关节软骨及不同程度骨关节炎患者关节软骨上的变化趋势，研究TRPM4通道与关节软骨退变的关系。
　　方法：
　　收集山西医科大学第二医院骨科外伤截肢患者正常膝关节软骨，根据年龄分为20~29岁组，30~39岁组，40~49岁组，每组6例；收集OA患者膝关节置换关节软骨，根据破坏程度分为软骨破坏轻组和软骨破坏重组，每组6例。番红O染色结果评价不同年龄正常膝关节及骨关节炎患者软骨退变程度，实时荧光定量聚合酶链反应法测定TRPM4 mRNA在基因水平的变化，免疫印迹法测定TRPM4蛋白水平的表达，免疫荧光和免疫组化分析TRPM4在关节软骨及细胞表面的分布。
　　结果：
　　番红O染色显示，随着患者年龄的增加，关节软骨表面逐渐由光滑变毛糙，细胞间区染色逐渐由深红色变为浅红色，OA患者糖胺多糖退变更明显。人膝关节软骨上存在TRPM4蛋白通道。随着年龄的增加，正常软骨中各组TRPM4 mRNA和蛋白逐渐增加，差别有统计学意义（P<0.05），并且年龄和TRPM4蛋白表达量呈正相关（r=0.632，P<0.01）。随着关节软骨破坏的加重，软骨中TRPM4的mRNA和蛋白显著增加，差别有统计学意义（P<0.05），且TRPM4蛋白表达量和破坏程度正相关（r=0.714，P<0.01）。免疫荧光显示，TRPM4主要位于软骨细胞膜上。免疫组化显示，TRPM4位于软骨浅中层。
　　结论：
　　TRPM4在人类膝关节软骨细胞中表达，且存在于关节软骨的浅中层细胞的细胞膜上。在正常人群中，随着年龄的增长，TRPM4的表达量逐渐增加，在骨关节炎患者中，随着破坏的加重，TRPM4表达量逐渐增加，并且，TRPM4的表达量与年龄变化及骨关节炎软骨破坏程度呈正相关。目前，TRPM4在软骨细胞的生理作用和病理生理机制仍不清楚，下一步我们的研究重点将关注于TRPM4通道蛋白在正常软骨细胞和关节炎软骨细胞中的功能，以便关节软骨细胞退变的保护和预防，为治疗骨关节炎提供新的靶点。

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前言

1 材料与方法

1.1 主要实验仪器试剂和设备

1.2 研究方法及步骤

1.3 统计学分析

2 结 果

2.1 正常膝关节和OA患者膝关节大体形态及番红O染色

2.2 正常关节软骨中，随年龄变化TRPM4的基因表达变化趋势

2.3 骨关节炎患者软骨中随着软骨破坏，TRPM4的基因表达变化趋势

2.4 正常关节软骨中，随年龄变化TRPM4通道蛋白的表达变化趋势

2.5 骨关节炎患者软骨中随着软骨破坏程度的加重，TRPM4通道蛋白的表达量变化趋势

2.6 免疫组化对TRPM4阳性表达细胞进行关节软骨组织定位

2.7 免疫荧光对TRPM4阳性表达细胞进行软骨细胞定位

3 讨 论

4 结 论

参考文献

综述: TRPM4的研究进展

致谢

在学期间承担/参与的科研课题与研究成果

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