VVC患者临床分离白念珠菌white-gray-opaque三稳态转换对其毒力活性的影响

摘要

目的：
　　1、了解本地区VVC患者念珠菌的菌种分布情况及对唑类药物的敏感性；
　　2、通过YPD培养基、Lee,s葡糖糖培养基、Lee,s N-乙酰葡糖胺（GlcNAC）培养基、CO2及温度来诱导white、gray、opaque三种不同表型细胞的产生。
　　3、利用牛血清白蛋白培养基（BSA）检测white、gray、opaque三种不同表型细胞分泌型天冬氨酸蛋白酶（Sap）的活性差异。
　　方法：
　　纳入2015年2月至2015年10月就诊于本科门诊，疑似 VVC患者阴道分泌物标本252例，并通过10％KOH镜检、沙堡弱培养基培养、CHROMagar念珠菌显色培养、API20CAUX鉴定系统进行培养分离鉴定，初步获得64株白念珠菌，采用 ATB Fungus3酵母菌样真菌敏感性检测系统对其进行药敏试验。提取64株白念珠菌的基因组DNA，真菌通用引物进行PCR扩增，分子生物学方法进一步检测其是否为白念珠菌。利用MTLa1、MTLɑ2特异性引物，筛选出MTL纯合型菌株。先利用YPD培养基对其进行表型初筛，再利用温度、CO2含量的不同、Lee's葡萄糖和Lee's N-乙酰葡糖胺（GlcNAC）培养基来诱导其他两种表型细胞的产生，最后利用BSA培养基检测每株菌株三种不同表型细胞Sap活性大小，从而反应白念珠菌的表型转换对其毒力活性的影响。
　　结果：
　　（1）共收集 VVC患者阴道分泌物252份，真菌培养阳性者154例，阳性率为61.1%。其中白念珠菌64株（41.6%），热带念珠菌31株（20.1%），光滑念珠菌22株（14.3%），近平滑念珠菌8株（5.2%），克柔念珠菌5株（3.2%），其它24株（15.6%）。
　　（2）64株白念珠菌药敏试验结果：白念珠菌对5-氟胞嘧啶和两性霉素B有较高的敏感性，对氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑的耐药率分别为39.01%、40.63%和45.31%，存在交叉耐药现象。
　　(3)64株菌株的MTL a、ɑ基因筛查显示只有3株为纯合型菌株（F22为a/a型， F10、F48为ɑ/ɑ型），余均为a/ɑ杂合型。
　　(4)64株菌株中只有3株纯合型菌株成功进行了表型转换，诱导出white、gray和opaque三种不同表型细胞。
　　（5）3株菌株white、gray、opaque细胞Sap分泌活性存在差异，其活性大小依次为gray、opaque、white。
　　结论：
　　1、本地区 VVC患者所感染的致病真菌仍以白念珠菌为主，对FCA耐药率相对较低，可作为临床治疗的一线用药。
　　2、利用不同的培养基、温度、不同CO2浓度，可以成功诱导MTL纯合型菌株进行表型转换，得到white、gray、opaque三种细胞。
　　3、VVC患者分离出的白念珠菌中三种不同表型细胞的毒力gray>opaque>white。