抗凝血类杀鼠药及其代谢物的法医毒物动力学研究（一）-敌鼠、华法林、溴敌隆及代谢物苄叉丙酮在犬体内的毒物动力学和死后分布

摘要

目的： 1、建立敌鼠、华法林、溴敌隆及代谢物苄叉丙酮的GC-MS/MS（三重四级杆气质联用仪）检测方法； 2、观察敌鼠、华法林、溴敌隆及代谢物苄叉丙酮在犬体内的毒物动力学和死后分布规律。 方法： 样品处理和检测：生物样品中添加阿普比妥（内标）1μg后采用液液萃取（LLE）法提取，GC-MS/MS法检测，使用 MRM模式，通过安捷伦自带定性定量软件（Qualitative and Quantitative Analysis B.06.00）利用保留时间（RT）以及定性离子对定性，内标法定量离子对结合工作曲线法定量。 毒物动力学模型：犬经灌胃给药（2LD50、4LD50）后，每隔24h取血、尿。检材密封后于-20℃保存待检。 死后分布模型：上述剂量模型，待其死亡，解剖取心血、外周血、胆汁、尿、心、肝、脾、肺、肾、脑、膀胱、左下肢肌、胃、胃内容物、胰腺，密封后于-20℃保存待检。 数据处理方法：仪器配备的B.06.00定性和定量软件，WinNonlin药代动力学软件，SPSS统计学软件，excel办公软件。 结果： 1、敌鼠、华法林、溴敌隆和苄叉丙酮的最低定量限（S/N=3）和工作曲线方程分别为0.05μg/mL、0.0002μg/mL、0.001μg/mL、0.002μg/mL；Y=23.515854X-9.142610(0.05~40μg/mL)、Y=1.404062X+6.253128（0.002~10μg/mL）、Y=0.209386X-0.004510（0.01~20μg/mL）、Y=2.319675X-0.028696（0.002~10μg/mL）。回收率，日内、日间精密度均达到生物检材分析方法的要求。 2、毒物动力学：敌鼠、华法林、溴敌隆及代谢物苄叉丙酮在中毒犬血液和尿液中的毒物动力学均符合口服一室模型。血中敌鼠、华法林、溴敌隆的吸收半衰期范围：15.19 h～44.96h；消除半衰期范围：15.14h～41.88h；Tmax范围：43.74h～125.17h；Cmax范围：8.25μg/mL～651.24μg/mL。苄叉丙酮的吸收半衰期范围：16.05h～32.14h；消除半衰期范围：16.2h～32.16h；Tmax范围：46.62h～92.76h；Cmax范围：1.87μg/mL～58.32μg/mL。尿中敌鼠、华法林、溴敌隆的吸收半衰期范围：4.56±4.11h～29.80±9.66h；消除半衰期范围：12.25±2.06h～113.69±54.81h；Tmax范围：36.00±68.27h～89.73±100.19h；Cmax范围：5.83±0.82μg/mL～304.35±316.66μg/mL。苄叉丙酮的吸收半衰期范围：12.70±3.22h～39.11±30.82h；消除半衰期范围：18.29±6.91h～40.02±31.98h；Tmax范围：41.84±1.01h～112.74±88.44h；Cmax范围：2.24±0.23μg/mL～34.78±25.22μg/mL。 3、死后分布：敌鼠组，敌鼠含量最高的脏器是胆汁；苄叉丙酮的含量最高的脏器为心血和胃。华法林4LD50组，犬体内华法林含量最高的脏器为胆汁；苄叉丙酮的含量最高的脏器为尿液。华法林2LD50组，犬体内华法林和代谢物苄叉丙酮各脏器的含量均无统计学差异。溴敌隆组，犬体内溴敌隆含量高的脏器为胆汁；苄叉丙酮的含量最高的脏器为胆汁、肺。 结论： 1、本研究建立了GC-MS/MS检测抗凝血类杀鼠药（敌鼠、华法林、溴敌隆）及其代谢物（苄叉丙酮）的定性、定量检测方法，该方法灵敏度高，重复性好，可以用于抗凝血类杀鼠药中毒案件的法医学鉴定。 2、本实验研究了敌鼠、华法林、溴敌隆及代谢物苄叉丙酮在中毒犬体内的毒物动力学规律。灌胃染毒犬，血和尿中敌鼠、华法林、溴敌隆原体和代谢物的毒物动力学过程均符合口服一室模型。 3、敌鼠、华法林、溴敌隆及代谢物苄叉丙酮在中毒致死犬体内的死后分布规律差异较大，但胆汁、肝脏、尿液、心血和外周血均可检出原体和代谢物，提示相关中毒案件法医学鉴定中，除采集血液外，还应提取胆汁、肝脏和尿液进行毒物分析。

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前言

第一部分 敌鼠、华法林、溴敌隆及代谢物苄叉丙酮的GC-MS/MS检测

1 材料和方法

2 结 果

3 讨 论

第二部分 敌鼠、华法林、溴敌隆及代谢物苄叉丙酮在犬体内的毒物动力学研究

1 材料和方法

2 结 果

3 讨 论

第三部分 敌鼠、华法林、溴敌隆及代谢物苄叉丙酮在犬体内的死后分布研究

1 材料和方法

2 结 果

3 讨 论

结论

参考文献

综述: 抗凝血杀鼠药的分析研究进展

致谢

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