自制靶向膀胱癌纳米超声造影剂及其荷瘤鼠体内靶向实验研究

摘要

目的：自制靶向膀胱癌BIU-87细胞纳米微泡并探究其体内对肿瘤的靶向性。
　　方法：通过机械振动法、生物素亲和素桥接法成功制备靶向纳米微泡造影剂，选取已成功移植膀胱癌细胞株BIU-87两周的SPF级BALB/c-nu雄性荷瘤裸鼠12只随机分为两组。实验组（n=6；体重：22g-24g)尾静脉注射200μL导向肽NYZL1（环七肽CSSPIGRHC,Cys-Ser-Ser-Pro-Ile-Gly-Arg-His-Cys)介导纳米微泡造影剂；对照组（n=6；体重：21.5g±24.5g)尾静脉注射200μl普通纳米微泡造影剂；使用介入超声仪动态观察体内移植瘤显影效果（起始显影时间、最大峰值灰度值、造影剂持续显影时间、造影剂半衰减时间）及肿瘤分子荧光成像。
　　结果：1．成功制备靶向BIU-87细胞纳米超声微泡，经检测90％以上的纳米微泡粒径在500-700纳米之间。自制超声纳米脂质微泡物理性质稳定，表观为乳白色液体，微泡粒径大小均一，分散度好；400*光镜下呈球形。
　　2.纳米超声微泡220μmol/L为最佳注射浓度，200μL注射量经尾静脉团块状注射入裸鼠体内，超声造影结果显示：脂质微泡体内循环后移植瘤显像，靶向实验组约10秒后瘤体内回声开始增强，超声灰度逐渐增强达到最高峰值，普通对照组约13秒瘤体开始显像并逐渐达峰值浓度，超声峰值灰度靶向实验组约19.76±1.95dB控制组约15.49±1.85dB，P=0.003＜0.05,超声峰值灰度、持续显影平均时间靶向微泡造影剂明显高于普通微泡造影剂(P＜0.05)，靶向纳米微泡体内代谢半衰减时间较普通微泡明显延长(P＜0.05)，因此，靶向微泡造影剂能高度特异性结合肿瘤，结合能力强，作用时间持久，具有膀胱肿瘤靶向作用。
　　3.尾静脉注射cy7近红外荧光探针修饰的膀胱癌导向肽CSSPIGRHC序列4小时后移植瘤显影达最强，且体外分子成像可见肾脏显影，余其它脏器未见明显显影，且肾脏持续显影，12小时后移植瘤无显影，进一步验证了CSSPIGRHC多肽序列对膀胱癌BIU87的靶向作用。
　　结论：自制靶向膀胱肿瘤BIU-87纳米脂质微泡能很稳定的与裸鼠移植瘤结合，并可通过体内外超声影像设备及分子成像仪精准探查靶向纳米微泡造影剂于瘤体高浓度持久聚集，NYZL1介导的靶向纳米微泡能特异性结合膀胱肿瘤，且结合能力强，靶向性能好，不易被体内的吞噬系统清除，可能成为未来膀胱癌精准诊疗的重要小分子载体，使膀胱癌早期精准医学诊疗成为可能。