新型GLP-1/GIP双受体激动剂对帕金森病MPTP模型小鼠神经保护作用的研究及其与利拉鲁肽的比较

摘要

目的：①观察新型的GLP-1/GIP双受体激动剂对MPTP诱导的帕金森病小鼠模型的运动障碍、神经炎症反应及神经营养因子释放的影响；②比较新型的GLP-1/GIP双受体激动剂DA3-CH与GLP-1单受体激动剂Liraglutide对于帕金森病小鼠模型的保护作用。
　　方法：C57bl/6雄性小鼠随机分为4组，每组10只：(1)对照组(Control组)：给予生理盐水腹腔注射(0.2ml/日)；(2)MPTP模型组(MPTP组)：腹腔注射MPTP(25mg/kg/日)；(3)DA3-CH组：在腹腔注射MPTP(25 mg/kg/日)的基础上，30分钟后腹腔注射DA3-CH(25nmol/kg/日)；(4) liraglutide组(利拉鲁肽组)，腹腔注射MPTP(20 mg/kg/日)基础上，30分钟后给予Liraglutide(25nmol/kg/日)再次腹腔注射。按照上述给药方案，连续处理7日，在此期间对小鼠进行体重监测、血糖监测、转棒实验、悬挂试验行为学检测。第8日将小鼠处死并提取脑组织，采用免疫组织化学方法对小鼠黑质区酪氨酸羟化酶（Tyrosine hydroxylase，TH）标记的多巴胺能神经元、离子钙接头受体分子-1（Ionized calcium bindingadaptor molecule-1，IBA-1）标记的小胶质细胞、胶质纤维酸性蛋白（Glial fibrillary acidic protein，GFAP）标记的星型胶质细胞、胶质细胞源性神经营养因子（Glial Derived Neurotrophic Factor，GDNF)标记的阳性细胞进行计数，并对纹状体区TH标记的多巴胺神经纤维阳性区域进行光密度值分析。使用Western Blot方法检测各组小鼠脑内TH、IBA-1、GFAP、GDNF的蛋白表达。
　　结果：⑴一般情况观察： MPTP模型组较正常组小鼠自主活动减少、有竖尾立毛现象、有较明显的肢体震颤、行走不稳；DA3-CH组及Liraglutide组较 MPTP模型组小鼠自主活动多、无竖毛现象出现、偶可见竖尾行为、无明显肢体震颤、行走不稳现象。⑵体重及血糖监测：当监测实验期间的血浆葡萄糖水平和体重时，发现各组之间葡萄糖水平及体重没有明显差异（p>0.05）。⑶在转棒实验及悬挂实验中，DA3-CH及Liraglutide均可改善MPTP导致的小鼠运动功能障碍(p<0.001)，且DA3-CH效果更加显著(p<0.001)。⑷TH阳性神经元及神经纤维数量：给以MPTP腹腔注射后，与对照组对比，黑质区TH阳性多巴胺能神经元及纹状体区TH阳性多巴胺神经纤维数目明显减少，差异显著(p<0.001)；DA3-CH组及Liraglutide组黑质区TH阳性多巴胺能神经元细胞数及纹状体区TH阳性多巴胺神经纤维均高于MPTP组(p<0.001)；DA3-CH组黑质区TH阳性多巴胺能神经元细胞数及纹状体区 TH阳性多巴胺神经纤维明显高于Liraglutide组(p<0.001)。⑸IBA-1阳性细胞数：MPTP模型组与对照组相较，黑质区IBA-1阳性细胞数目明显增多(p<0.001)；经DA3-CH及Liraglutide治疗后，黑质区IBA-1阳性细胞数减少(p<0.001)；而DA3-CH组黑质区IBA-1阳性细胞数明显少于Liraglutide组(p<0.001)。⑹GFAP阳性细胞数：与对照组相较，MPTP模型组黑质区GFAP阳性细胞数目均明显增多(p<0.001)；DA3-CH组及Liraglutide组比MPTP模型组黑质区GFAP阳性细胞数减少(p<0.001)；DA3-CH组黑质区GFAP阳性细胞数明显少于Liraglutide组(p<0.001)。⑺GDNF阳性细胞数：MPTP模型组与对照组比较，黑质区GDNF阳性细胞数目均明显减少(p<0.001)；DA3-CH组及Liraglutide组GDNF阳性细胞数明显高于MPTP组(p<0.001)；而DA3-CH组GDNF阳性细胞数明显高于Liraglutide组GDNF阳性细胞数(p<0.001)。⑻酪氨酸羟化酶TH含量：MPTP模型组、Liraglutide组、DA3-CH组较对照组的TH蛋白含量均减少(p<0.001)，MPTP模型组最少，Liraglutide组次之，DA3-CH组含量明显高于MPTP模型组及Liraglutide组(p<0.001)。⑼IBA-1表达水平：各处理组较对照组IBA-1表达量均明显增长(p<0.001)， MPTP模型组最多， Liraglutide组次之， DA3-CH组含量明显少于MPTP模型组及Liraglutide组(p<0.001)。⑽GFAP表达水平：生理盐水对照组GFAP表达量最低(p<0.001)，MPTP模型组GFAP表达量最多，Liraglutide组次之，DA3-CH组含量明显少于MPTP模型组及Liraglutide组(p<0.001)。⑾GDNF表达水平：与对照组比较，药物处理组的 GDNF表达量均降低(p<0.001)，MPTP模型组GDNF表达量最少，Liraglutide组次之，DA3-CH组GDNF含量明显高于MPTP模型组及Liraglutide组(p<0.001)。
　　结论：①新型GLP-1/GIP双受体激动剂DA3-CH可以增加小鼠黑质及纹状体区酪氨酸羟化酶TH含量、减轻黑质区神经炎症反应、促进胶质细胞源性神经营养因子GDNF的表达，改善由MPTP导致的PD小鼠的运动功能障碍，对帕金森病模型小鼠具有神经保护作用；②GLP-1受体和GIP受体联合激活比单独激动GLP-1受体对于帕金森病模型小鼠具有更显著的神经保护作用。

目录

声明

常用缩写词对照表

前言

1.材料与方法

1.1实验材料

1.1.1实验动物

1.1.2实验动物分组及处理

1.1.3实验试剂

1.1.4实验相关仪器

1.2 实验方法

1.2.1.血糖测量

1.2.2. 行为学实验

1.2.3.免疫组织化学：

1.2.4.Western blot

1.2.5.统计学分析

2 结 果

2.1实验药物对小鼠体重及血糖水平无影响

2.2保护药物可以改善MPTP模型小鼠的运动障碍

2.2.1转棒实验结果

2.2.2牵拉实验结果

2.3免疫组织化学实验结果

2.3.1保护药物可以改善MPTP模型组多巴胺能神经元的损伤

2.3.2 保护药物对小鼠脑内神经炎症反应有改善作用

2.3.3保护药促进MPTP小鼠皮质区GDNF的表达

2.4 Western Blot 结果分析

3 讨 论

4 结 论

参考文献

综述:神经炎症与帕金森病的关系

致谢

个人简历