糖尿病对小鼠牙齿伸长运动的影响

摘要

目的：
　　建立糖尿病小鼠伸长运动实验模型，研究糖尿病小鼠牙齿垂直向伸长过程中Ⅰ型胶原蛋白和富含酸性半胱氨酸的分泌蛋白（SPARC）的表达，探究小鼠牙齿伸长运动的机制以及糖尿病对其的影响，为临床上修复牙列缺损提供理论基础。
　　方法：
　　60只雄性8周龄C57BL/6J小鼠，体重在19-25g左右。小鼠随机分为两组，即对照组（正常组）与实验组（糖尿病组），每组30只；每组再随机分为5个亚组即0天、3天、6天、9天、12天组，每组各6只。实验组小鼠连续5天给予腹腔分次注射70mg/kg1％的链脲佐菌素（STZ），对照组注射同等剂量的柠檬酸缓冲液。注射后72小时后剪尾取血测量血糖，每周测量一次空腹血糖和体重，连续4周，空腹血糖值≥11.1mmol/L为建模成功，建模成功后进行实验。各组小鼠在3%水合氯醛全麻下行右侧上颌后牙拔除术，压迫止血拔牙部位。将两组小鼠分别在0天、3天、6天、9天、12天处死，提取下颌骨。标本在4%多聚甲醛溶液中固定24-48小时，10%EDTA脱钙液脱钙40-50天，常规脱水、浸蜡、包埋，切片，HE染色，观察拔牙后下颌牙齿伸长运动过程中牙周围组织细胞的变化；免疫组化染色，观察实验组与对照组在SPARC与Ⅰ型胶原蛋白的表达差异，运用免疫组化图像进行结果分析，测量表达面积与表达强度，计算平均灰度值与平均光密度（OD），用SPSS19.0统计学方法进行数据处理。
　　结果：
　　形态学：镜下与X线片显示12天后两组小鼠下颌磨牙向伸长，实验组伸长量小于对照组（P<0.05）；体重变化:实验组与对照组体重3-6天下降（P<0.05），实验组体重下降程度大于对照组；9天两组体重逐渐回升（P<0.05），12天时接近初始体重，实验组速度慢于对照组。HE染色：1.牙周膜宽度：实验组与对照组左右两侧第一磨牙根中1/3牙周膜宽度平均值无明显变化（P>0.05）；2.破骨细胞计数：实验组骨基质染色不均，骨线不整齐，骨质疏松，0天至12天细胞随时间呈增长趋势（P<0.05）；对照组0天时未见明显破骨细胞，3-12天破骨细胞逐渐增多，12天时最多（P<0.05），仅12天时实验组小于对照组，差异有统计学意义（P<0.05），其他各时间组均无统计学差异（P>0.05）。
　　SPARC与Ⅰ型胶原蛋白免疫组化：随着时间增加，平均灰度值逐渐降低，阳性表达逐渐增强，SPARC的平均灰度值与Ⅰ型胶原蛋白在不同时间点上，差异有统计学意义（P<0.05）。SPARC在0天、3天、6天、9天、12天时，实验组显著低于对照组，实验组表达强于对照组（P<0.05）；Ⅰ胶原蛋白除第6天外，其他各组实验组显著高于对照组，实验组表达低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。SPARC和Ⅰ型胶原蛋白的OD值随着时间的增加不断增大，差异有统计学意义（P<0.05）。实验组Ⅰ型胶原蛋白OD值低于对照组，SPARC的 OD值显著高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。
　　结论：
　　1.对照组与实验组小鼠拔除上颌牙后，对颌牙均有伸长现象，且糖尿病小鼠骨质疏松倾向伸长量小于正常组。
　　2.SPARC与Ⅰ型胶原蛋白在小鼠牙齿伸长运动过程中牙周组织中表达增强，提示可能与牙齿伸长运动有重要联系。
　　3.糖尿病小鼠骨改建能力减弱，牙齿伸长运动过程中破骨细胞活动受限制,Ⅰ型胶原代谢能力下降。

目录

声明

常用缩写词中英文对照表

前言

1 材料与方法

1.1试剂与仪器

1.2方法

2 结 果

2.1小鼠下颌牙伸长运动距离

2.2小鼠体重变化

2.3 HE组织染色结果

2.4免疫组化染色结果

3 讨 论

3.1牙齿伸长运动糖尿病小鼠实验模型的建立

3.2糖尿病小鼠牙齿伸长运动的组织学变化

4 结 论

参考文献

综述:牙齿萌出机制的研究进展

致谢

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