GMDTC静脉滴注对镉中毒兔模型治疗的剂量时效研究

摘要

目的：
　　探究静脉滴注 GMDTC不同剂量与不同给药时间的配比研究对镉中毒兔模型的治疗效果，寻找最佳治疗剂量与时间。
　　方法：
　　1.动物分组与处理：普通级雄性新西兰兔85只，随机分为空白组（10只、耳缘静脉注射生理盐水）和模型组[75只、耳缘静脉注射CdCl2（2.0μmol/kg）+ME（40μmol/kg）混合溶液]，5 mL/kg体质量，每天1次，给药5天后间隔35天。于实验第41天（复制镉中毒兔模型完成），将空白组随机分为空白对照组和GMDTC高剂量对照组(108 mg/kg)，5只/组；模型组随机分为模型对照组、EDTA对照组和GMDTC低剂(12 mg/kg)、中剂(36 mg/kg)、高剂(108 mg/kg)组，每组又分一周、两周和四周组，5只/组。空白对照组和模型对照组经耳缘静脉滴注0.9％氯化钠注射液250 mL，EDTA对照组经耳缘静脉滴注93.5 mg/kg EDTA溶液（根据体质量抽取相应浓度药液注入到250 mL生理盐水），GMDTC高剂量对照组和GMDTC低、中、高剂量组新西兰兔分别经耳缘静脉滴注108、12、36、108 mg/kg GMDTC溶液（根据体质量抽取相应浓度的药液注入到250 mL生理盐水中），30~35滴/h，1次/天，6次/周。
　　2.样品收集与检测：GMDTC静脉滴注治疗前，连续3天每天收集2 mL尿样，用于检测肌酐与β2-MG水平；GMDTC静脉滴注治疗期间，每周的第1天和第6天收集尿液。每次收集时间分两段，第一段：开始静脉滴注至6h，第二段：6h至次日24h，用于尿镉检测。GMDTC静脉滴注治疗前1天与解剖前1天兔耳中动脉采集抗凝血与非抗凝血，用于血镉与血生化检测。分别于实验第48天、55天和68天麻醉放血处死实验动物，分别将其肝、肾、睾丸消化后用于 Cd2+与机体必需微量和常量元素检测，股骨消化后用于骨Cd2+与骨Ca2+检测；并对肝、肾和睾丸做病理检测。
　　结果：
　　1.尿β2-MG：复制镉中毒兔模型完成时（静脉滴注治疗前），连续3天各模型对照组和治疗组尿β2-MG含量均高于空白对照组（P<0.05）。
　　2.尿镉：
　　2.1静脉滴注0~6h尿镉：与同时间点模型对照组比较，GMDTC高剂量组新西兰兔0~6h尿镉均升高（P<0.05），治疗第1天，各EDTA对照组和GMDTC中、高剂量各组新西兰兔0~6h尿镉均升高（P<0.05或 P<0.01）；与同组治疗第1天比较， GMDTC高剂量组第13天、15天、20天、22天和第27天新西兰兔0~6h尿镉均降低（P<0.05）。治疗第1天，各EDTA对照组、GMDTC低剂各组、中剂各组和高剂各组尿镉排出量分别是同时间点模型对照组的6~12倍、2~5倍、8~16倍和60~126倍。
　　2.2静脉滴注7~24h尿镉：与同时间点模型对照组比较，GMDTC高剂量组新西兰兔7~24h尿镉均升高（P<0.05）；与同组治疗第1天比较，GMDTC高剂量组第15天、20天、22天和第27天新西兰兔7~24h尿镉均降低（P<0.05）。治疗第1天，各EDTA对照组、GMDTC低剂各组、中剂各组和高剂量各组尿镉排出量分别是同时间点模型对照组的9~30倍、2~5倍、5~7倍和66~102倍。
　　3.血镉：治疗结束，与同时间点模型对照组比较，EDTA对照四周组、GMDTC低剂量四周组、中剂两、四周组和高剂四周组血镉均降低（P<0.01）；与同组静脉滴注前比较，各模型对照组和各治疗组血镉均降低（P<0.05），但各组血镉下降率存在明显差异。模型对照组、EDTA对照组和GMDTC低、中、高剂量组静脉滴注治疗4周的血镉下降率分别为34.49%、84.37%、77.92%、85.34%和86.10%。
　　4.肾镉：与同时间点模型对照组比较，GMDTC中剂一周、四周和高剂各组肾镉均降低（P<0.01），EDTA对照一、两周组肾镉反而升高。EDTA、GMDTC低、中和高剂量组静脉滴注治疗4周的肾镉驱除率分别是1.29%、14.25%、27.96%和61.24%。
　　5.脏器镉：各模型对照组、EDTA对照组、GMDTC各治疗组睾丸镉、肝脏镉和股骨镉均高于空白对照组（P<0.01）。
　　6.血和脏器中必需金属元素
　　6.1血和肝脏中必需金属元素：静脉滴注治疗结束时，各处理组血和肝脏中机体金属元素与空白组比较均无统计学差异（P>0.05）。
　　6.2肾脏中必需金属元素：与空白对照组比较，EDTA对照一周、两周组肾脏Fe2+均降低（P<0.05），模型对照四周组、GMDTC中剂四周组肾脏Fe2+升高（P<0.05）。
　　6.3睾丸中必需金属元素：与空白对照组比较，EDTA对照两周组、GMDTC低、中剂量一周、两周组和高剂一周组睾丸中Ca2+均降低（P<0.05或P<0.01）；与空白对照组比较，模型对照一周组、EDTA对照两周组、GMDTC低、中剂量一、两周组和高剂量一周组睾丸中Zn2+均降低（P<0.05或P<0.01）。
　　7.股骨检测：各处理组骨密度、骨钙和骨生物力学与空白对照组比较均无统计学差异（P>0.05）。
　　8.病理检测结果
　　8.1肝脏：模型对照组和各治疗组均出现肝脏损伤，主要表现为水样变性与炎性细胞浸润，模型对照一周、四周组肝脏病变比例100%，其余各治疗组肝脏病变比例均比模型对照组小。
　　8.2肾脏：模型对照组和各治疗组均出现肾脏损伤，主要表现为间质性肾炎、肾盂肾炎、空泡变性与肾小管细胞管型，各时间点模型对照组肾脏病变程度重、比例高， EDTA对照四周组肾脏病变比例和模型对照组无差异，GMDTC中、高剂个别组肾脏病变比例较低，其中GMDTC高剂量两周组肾脏无病理改变。
　　8.3睾丸：模型组和各治疗组均出现睾丸损伤，主要表现为曲细精管萎缩、官腔变大与多核巨噬细胞浸润，模型对照组和各治疗组睾丸病变比例无差异。
　　结论：
　　1. GMDTC（108 mg/kg）剂量下尿镉排出量高达模型对照组的100倍，并且是EDTA治疗组的9~10倍，GMDTC可显著促进体内镉经尿排出。
　　2. GMDTC（108 mg/kg）剂量下治疗两周和四周的肾镉驱镉率高达52.12%和61.24%，GMDTC可显著驱除肾细胞内镉。
　　3. GMDTC（108 mg/kg）治疗4周可显著驱除机体内的镉，达到驱镉目的。
　　4. GMDTC（108 mg/kg）时，相当于人用剂量36 mg/kg，即1.8 g/天的用药量，对动物脏器系数没有影响，对脏器必需金属元素影响较小，且能缓解镉引起的肝脏、
　　肾脏毒性，本身毒副作用小，用药量适中，满足成药的基本要求。
　　本课题为广东省科技计划项目“特效解毒剂 GMDTC的驱镉作用机制研究（2016A030310319）”。

目录

声明

常用缩写词中英文对照表

前言

1 材料与方法

1.1 实验用主要试剂

1.2 实验用主要仪器

1.3 主要试剂配制

1.4 实验动物

1.5 实验方法

1.6 样本采集

1.7 检测指标

1.8 统计分析

2 结 果

2.1 实验动物一般观察

2.2 复制镉中毒兔模型完成时尿β2-MG水平

2.3 GMDTC治疗镉中毒兔模型结束时血清电解质与生化指标水平

2.4 GMDTC治疗镉中毒兔模型期间尿镉动态观察结果

2.5 实验过程中血镉水平

2.6 GMDTC治疗镉中毒兔模型结束时组织中镉含量

2.7 实验过程血中必需金属元素水平

2.8 GMDTC治疗镉中毒兔模型脏器中必需金属元素水平

2.9 GMDTC治疗镉中毒兔模型结束时骨密度、骨钙与生物力学结果

2.10 GMDTC治疗镉中毒兔模型结束时脏器系数结果

2.11 静脉滴注治疗后新西兰兔脏器病理结果

3 讨 论

3.1 复制镉中毒兔模型方法选择

3.2 GMDTC静脉滴注治疗镉中毒兔的效果观察

3.3 GMDTC静脉滴注治疗镉中毒兔的安全性探究

3.4 GMDTC驱镉效果比较分析

4 结 论

创新、不足与展望

创新

不足

展望

参考文献

综述:镉毒性作用与治疗研究

致谢

个人简历