啤酒花中黄腐酚的提取纯化方法及其降脂、抗氧化作用的研究

摘要

黄腐酚（Xanthohumol）是存在于啤酒花中的一种结构简单的含异戊二烯基的黄酮类物质，目前发现黄腐酚仅存在于啤酒花中，是啤酒花中主要的黄酮类物质之一。啤酒花用于啤酒酿造中的主要有效成分是酒花树脂及酒花油。超临界CO2可以实现对这些成分的有效萃取，制备的啤酒花浸膏因质量稳定，易于储存和利用率高等特点在啤酒酿造中的使用量正在逐年增加。但是唯一存在于酒花中的黄腐酚却不能被超临界CO2萃取出来，残留在超临界CO2萃余物——废酒花中，而这些废酒花基本上作为废弃物，未得到有效利用。因此，本文主要研究了从超临界CO2萃余物即废酒花中提取及分离纯化黄腐酚，并通过小鼠动物实验研究了黄腐酚的降血脂及抗氧化的功能，为降血脂和预防动脉粥样硬化提供新药来源，可为废酒花的再利用提供理论基础。主要研究内容及结果如下
　　(1)实验对超声波和恒温气浴震荡两种方式提取黄腐酚进行了对比，通过实验表明，超声波提取方式优于恒温气浴震荡。
　　(2)实验采用甲醇、乙醇和丙酮作为提取溶剂提取废酒花中的黄腐酚，提取液经HPLC测定结果表明，丙酮作为提取溶剂得到的黄腐酚含量最高，甲醇和乙醇提取得到的黄腐酚含量相当，但考虑到溶剂残留的毒性问题，实验选择乙醇作为提取溶剂。
　　(3)实验对几种不同分离纯化黄腐酚的方法进行了验证，包括大孔树脂吸附法、溶剂多步萃取法、硅藻土吸附法及碳酸钠盐析法，得到的黄腐酚纯化物最高的为溶剂多步萃取法(51.2％)，但得率低(19.34％)，得率最高的为大孔树脂吸附法(93.56％)，但纯度较低(11.6％)。以后的实验中考虑先采用大孔树脂吸附法初步分离，再用溶剂多步萃取法进一步纯化黄腐酚。
　　(4)通过小鼠体内实验得出:XN低(2mg/10g bw·d)、中(6mg/10g bw·d)、高(12mg/10g bw·d)三个剂量组均可显著降低小鼠血清中的TG，并且可显著升高小鼠血清中的HDL-C，表明黄腐酚有降血脂的作用;高脂组小鼠饲用黄腐酚后，血清MDA含量降低，肝脏SOD活力升高，血清和肝脏CAT活力升高，表明黄腐酚有抗氧化的作用;高剂量黄腐酚(12mg/10g bw·d)有导致胆固醇代谢紊乱的作用;正常小鼠饲用中剂量(6mg/10gbw·d)黄腐酚对体内脂代谢没有影响;正常小鼠饲用中剂量(6mg/10g bw·d)黄腐酚后，血清GSH-Px、CAT活力显著降低，肝脏MDA含量显著升高，SOD、GSH-Px活力显著降低，表明中剂量黄腐酚对小鼠体内有氧化损伤作用。
　　(5)通过分光光度法和电泳法两种方法，验证了不同浓度的黄腐酚样品对小牛胸腺DNA损伤的影响，分光光度法结果表明，当黄腐酚浓度在一定范围内时(XN浓度小于0.5mg/ml)，黄腐酚对DNA损伤有抑制作用;电泳法实验结果表明黄腐酚浓度在0.1-1.5mg/ml范围内，对DNA损伤有抑制作用且随着浓度的增加对DNA损伤的抑制作用逐渐加强。

目录

摘要

第一章 文献综述

1 黄腐酚的研究现状

1．1 黄腐酚简介

1．2 黄腐酚的生物活性

1．3 黄腐酚的提取和分离纯化方法

2 啤酒花概述

2．1 啤酒花简介

2．2 啤酒花的化学成分

2．3 啤酒花的价值

3 本课题研究目的、意义及研究内容

3．1 本课题研究的目的与意义

3．2 本课题的研究内容

第二章 废酒花中黄腐酚的提取及分离纯化研究

1 材料与仪器

1．1 实验材料

1．2 实验试剂

1．3 实验仪器

2 实验方法

2．1 黄腐酚的HPLC测定方法

2．2 超临界CO2萃余物(废酒花)的制备

2．3 废酒花中黄腐酚的提取方法

2．4 黄腐酚纯化方法的选择

3 结果与分析

3．1 酒花黄腐酚测定标准曲线

3．2 超临界CO2萃取法对酒花中黄腐酚含量的影响

3．3 黄腐酚提取方法的实验结果

3．4 不同方法纯化黄腐酚的结果

3．5 不同方法纯化黄腐酚结果比较

4 小结

第三章 黄腐酚对实验性高脂血症小鼠降脂、抗氧化作用的研究

1 材料与仪器

1．1 实验材料

1．2 实验动物

1．3 小鼠饲料

1．4 试剂

1．5 仪器

2 方法与步骤

2．1 小鼠饲养及处理

2．2 实验小鼠的分组

2．3 待测样品的制备

2．4 肝匀浆中蛋白含量的测定

2．5 小鼠体内血脂及肝脂指标的测定

2．6 小鼠体内抗氧化指标的测定

2．7 数据的处理

3 结果与讨论

3．1 黄腐酚对高血脂症小鼠血脂水平的影响

3．2 黄腐酚对高血脂症小鼠肝脂水平的影响

3．3 黄腐酚对小鼠体内血清中抗氧化酶活力及MDA含量的影响

3．4 黄腐酚对小鼠肝脏中抗氧化酶活力及MDA含量的影响

4 小结

第四章 黄腐酚对DNA损伤的影响

1 实验材料与仪器

1．1 实验材料

1．2 实验试剂

1．3 实验仪器

2 实验方法

2．1 分光光度法测定DNA损伤程度

2．2 电泳法测定DNA损伤程度

3 结果与讨论

3．1 分光光度法测定DNA损伤程度结果

3．2 电泳法测定DNA损伤程度结果

4 小结

参考文献

攻读学位期间取得的研究成果

致谢

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