基于血清药物化学的逍遥散抗抑郁有效部位药代动力学初探

摘要

选题依据:抑郁症为一种常见的精神疾病，预测其到2020年将要成为世界第二大致残性疾病，受到众多医药工作者的重视。因现有的西药具有复发率高和副作用大等问题，从中药中研发理想的抗抑郁药就成为研究热点。逍遥散作为传统的抗抑郁名方为众多研究者的首选，但其抗抑郁物质基础、药物在体内代谢特征及作用机理均不明确。本课题组前期研究已经明确了逍遥散中石油醚部位具有抗抑郁活性，但是有效部位进入生物体内后有哪些化学成分在治疗作用、它们之间是否有协调作用、又是怎样协调发挥作用来改善机体的状态、药物的作用机制及其体内动态变化规律等问题都不清楚，所以对逍遥散石油醚部位进行药代动力学的研究成为必不可少的研究内容。
　　目的:通过逍遥散抗抑郁有效部位的血清药物化学方法，找出血清中移行成分，对其药代动力学特征进行初步摸索，为下一步逍遥散药动学-药效学相关性探索以及逍遥散临床合理用药提供科学依据。
　　方法:首先，采用逍遥散抗抑郁有效部位的体外模拟血清样品，建立血清药物化学的分析方法与样品处理方法;再对给药途径、给药剂量和药物溶媒等因素优化，进行血清药物化学研究，查找血与组织中移行成分;然后，通过与对照品保留时间、紫外扫描图谱比较，并参考文献，对口服逍遥散石油醚部位后血中移行成分进行归属与指认;针对对照品不易获得的目标成分采用传统的植化方法制备，并进行结构鉴定;最后，根据前期研究确定目标药效成分，并考察灌胃给予大鼠逍遥散石油醚部位后其药代动力学行为，进行药动学研究。
　　结果:1.采用逍遥散抗抑郁有效部位的体外模拟血清样品，比较了用不同溶剂进行蛋白沉淀法与液液萃取法处理的血清样品处理方法，结果发现利用乙醚:异丙醇(95∶5)+10％HCl萃取法萃取率最高，平均回收率可达81.96％。
　　2.灌胃给予大鼠逍遥散石油醚部位后对其血中移行成分进行研究，在血清中发现了11个血中移行成分，其中8个成分是来自复方逍遥散石油醚部位的原型，且归属于柴胡、甘草和当归，指认出2种化合物，分别为2，8，10-十五烷三烯-4，6-二炔-1-醇(CH-1)和2，8，10-十五烷三烯-4，6-二炔-1-醇-乙酯(CH-2)，均源自柴胡药材，其他3个移行成分则可能是原型成分给药后在体内经代谢产生的代谢物;对尾静脉注射后心脏、肝脏和脑组织中移行成分进行分析，结果均发现13个分布成分，其中12个成分为原型，归属于柴胡、当归和白术，另1个推测为代谢物，指认出其中4种化合物，分别为CH-1、CH-2、藁本内酯和白术内酯Ⅰ。血清与组织中均指认出源自君药柴胡的化合物CH-1和CH-2在体内稳定存在，推测为药效成分，因此以其为目标进行药代动力学研究。
　　3.建立了同时测定血清中CH-1和CH-2的测定方法，并进行了严格的方法学考察，CH-1和CH-2的线性范围分别为0.67μg/ml～201μg/ml和0.55μg/ml～165μg/ml，最低定量限(LLOQ)分别为标准曲线最低点0.67μg/ml和0.55μg/ml，该方法简单稳定、准确可靠，可用于其药代动力学研究。灌胃给予大鼠3个不同剂量的逍遥散石油醚部位后，不同时间点采血并测定其血药浓度，并利用DAS3.0对结果进行统计分析。结果发现CH-1和CH-2化合物血药浓度-时间曲线具有双峰现象，吸收快(Cmax分别为0.75～0.79h和0.71～1.0h)、消除慢(t1/2β较大分别为17～35h和20～29h)、在大鼠体内两者都符合二室模型的特点。给予3个剂量逍遥散石油醚部位后，通过比较其药动参数AUC(0～∞)和Cmax值，化合物CH-1、CH-2的体内吸收和给药剂量之间并不存在线性关系。
　　结论:1.本课题初步建立了逍遥散石油醚部位血清药物化学研究方法，血清中找到了11个血中移行成分，组织中找到13个移行成分，共指认出4个化合物，分别为CH-1、CH-2、藁本内酯和白术内酯Ⅰ。
　　2.对灌胃给予大鼠3个不同剂量的逍遥散石油醚部位后两个血中移行成分CH-1和CH-2的药代动力学初步研究，发现其具有吸收快、消除慢和二室模型的特点，其体内吸收与给药剂量间不存在线性关系。

目录

摘要

第一章 引言

1．1 立题背景和意义

1．2 本课题的研究思路、技术流程图、研究内容及创新点

1．2．1 本课题研究思路、技术流程图和研究内容

1．2．2 本课题的主要创新点

第二章 综述

2．1 中药药代动力学研究概述

2．1．1 中药药代动力学研究方法

2．1．2 中药药代动力学的难点

2．1．3 中药药代动力学研究展望

2．2 中药血清药物化学研究概况

2．2．1 中药血清药物化学概念

2．2．2 中药血清药物化学的理论基础

2．2．3 中药血清药物化学的研究内容

2．2．4 中药血清药物化学的研究状况

2．3 现代检测方式在中药药代动力学中的应用

2．3．1 高效液相色谱法(HPLC)

2．3．2 气相色谱法(GC)

2．3．3 气相色谱-质谱(GC-MS)联用技术

2．3．4 液相色谱-质谱(LC-MS)联用技术

2．3．5 高效液相色谱-核磁共振(LC-NMR)联用

2．4 逍遥散与各单味药的药代动力学研究进展

2．4．1 逍遥散复方的药代动力学研究

2．4．2 柴胡药代动力学研究

2．4．3 当归药代动力学研究

2．4．4 白术药代动力学研究

2．4．5 白芍药代动力学研究

2．4．6 甘草药代动力学研究

2．4．7 茯苓药代动力学研究

第三章 血清药物化学分析方法建立

3．1 引言

3．2 实验材料

3．2．1 实验仪器

3．2．2 实验试药与试剂

3．2．3 实验动物与样品采集

3．3 逍遥散石油醚部位中化学成分的归属

3．3．1 样品制备

3．3．2 色谱条件

3．3．3 实验结果与讨论

3．4 色谱条件的优化

3．4．1 HPLC色谱条件的优化

3．4．2 UPLC色谱条件的优化

3．5 血清与血浆选择

3．6 血清样品处理方法优化

3．7 实验结论

第四章 逍遥散石油醚部位血清药物化学的研究

4．1 引言

4．2 实验材料

4．2．1 实验仪器

4．2．2 实验试药与试剂

4．2．3 实验动物

4．3 体内移行成分的发现与检测

4．3．1 血中移行成分的发现与检测

4．3．2 组织中移行成分的发现与检测

4．4 体内移行成分的归属与指认

4．4．1 血中移行成分的归属与指认

4．4．2 组织分布成分的归属与指认

4．5 讨论

4．6 结论

第五章 化合物CH-1和CH-2标准品的分离纯化

5．1 引言

5．2 实验材料

5．2．1 实验仪器

5．2．2 实验试剂和试药

5．3 实验方法

5．3．1 柴胡石油醚部位的提取

5．3．2 柴胡石油醚部位的粗分离

5．3．3 CH-1和CH-2化合物的精细分离

5．3．4 CH-1和CH-2化合物的纯化制备方法

5．3．4 CH-1和CH-2化合物的纯度检测方法

5．4 实验结果

5．4．1 CH-1和CH-2化合物的结构鉴定

5．3．2 CH-1和CH-2化合物的纯化分析

5．3．3 CH-1和CH-2化合物的纯度检测

5．5 结论

第六章 基于逍遥散石油醚部位的CH-1和CH-2化合物的药代动力学初步研究

6．1 引言

6．2 实验材料

6．2．1 实验仪器

6．2．2 实验试剂和试药

6．2．3 实验动物

6．3 实验方法

6．3．1 大鼠血清样品中CH-1和CH-2分析方法的建立

6．3．2 方法学考察

6．3．3 灌胃给予逍遥散石油醚有效部位后CH-1和CH-2的药代动力学研究

6．4 实验结果

6．4．1 方法学考察

6．4．2 药动学研究结果

6．5 结论与讨论

第七章 其他工作：基于尿液UPLC-MS代谢组学技术的逍遥散抗抑郁代谢组学分析

7．1 引言

7．2 实验材料

7．2．1 实验仪器

7．2．2 实验试剂和试药

7．2．3 逍遥散复方水提物与单味药材的水提物样品制备

7．2．4 实验动物

7．3 实验方法

7．3．1 逍遥散复方水提物的化学成分归属色谱条件

7．3．2 动物分组及给药剂量

7．3．3 CUMS模型的复制

7．3．4 行为学观察

7．3．5 尿液样本的采集

7．3．6 尿样的处理方法

7．3．7 大鼠尿样的UPLC-MS检测条件

7．3．8 数据分析

7．4 实验结果与讨论

7．4．1 逍遥散水提物中化学成分的归属与指认

7．4．2 行为学实验结果

7．4．3 UPLC-MS代谢组学研究结果

7．4．4 标志物生化途径的解释

7．5 结论

第八章 总结与展望

8．1 研究工作总结

8．2 不足与展望

参考文献

已发表论文

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