胞质雄性不育新基因T1243在大白菜中的遗传转化

摘要

目前在大白菜杂交育种实践中，雄性不育材料非常少，本研究旨在将从茎瘤芥(B.juncea var.tumida Tsen et Lee)胞质雄性不育系中克隆获得的T1243基因整合到大白菜基因组中。首先构建含有茎瘤芥的细胞质雄性不育新基因T1243的植物表达载体XF003-T1243;建立大白菜的离体再生体系;并对大白菜的遗传转化体系进行优化，成功获得转基因植株。丰富大白菜不育系的育种材料，为细胞质雄性不育机理研究奠定了基础。
　　 本试验的主要研究结果如下:
　　 1、大白菜再生体系的建立:以山西地区广泛栽培的5个大白菜品种为材料，带柄子叶为外植体，通过正交设计试验研究了品种、NAA、6-BA、AgNO3等因素对大白菜离体再生的影响。结果显示:品种津育75在培养基MS+2mg/L6-BA+0.3mg/LNAA+7mg/LAgNO3的条件下再生率最高，达76.92％。
　　 2、植物表达载体XF003-T1243的构建:分别酶切从茎瘤芥中扩增获得的T1243和表达载体XF003，然后进行连接，构建了细胞质雄性不育线粒体基因T1243的植物表达载体XF003-T1243，通过PCR和酶切鉴定XF003-T1243载体构建正确，并导入农杆菌LBA4404。
　　 3、大白菜的遗传转化体系的优化:以大白菜带柄子叶为外植体，通过农杆菌介导法，优化大白菜的遗传转化体系，得出结论:津育75的最佳筛选培养基为MS+2.0mg/L6-BA+0.3mg/LNAA+7.0mg/LAgNO3+7.5mg/LKan+200mg/LAmp,外植体在黑暗条件下预培养2d，然后用OD6000.1菌液侵染2min，共培养2d时转化率最高，为35.48％。对抗性植株进行分子检测，结果表明T1243基因已整合到大白菜基因组中，并可以正常表达。

目录

论文说明

摘要

第一章 综述

1．1 植物雄性不育

1．1．1 植物雄性不育的类型

1．1．2 植物CMS在杂种优势中的应用

1．1．3 植物CMS的分子机制

1．2 大白菜离体再生的研究现状

1．2．1 基因型

1．2．2 外植体类型

1．2．3 外植体生理状态

1．2．4 分化培养基

1．2．5 生根培养基

1．3 大白菜遗传转化研究现状

1．3．1 菌株

1．3．2 再生体系

1．3．3 外植体类型及生理状态

1．3．4 抗生素

1．3．5 农杆菌侵染方法

1．4 本课题研究的目的和意义

第二章 大白菜再生体系的建立

2．1 材料和方法

2．1．1 材料

2．1．2 方法

2．2 结果与分析

2．2．1 大白菜离体再生体系的建立

2．2．2 生根培养和移栽

2．3 讨论

第三章 植物表达载体XF003-T1243的构建

3．1 材料和方法

3．1．1 材料

3．1．2 方法

3．2 结果与分析

3．2．1 T1243基因的扩增和酶切

3．2．2 酶切、纯化和连接

3．2．3 重组质粒XF003-T1243的鉴定

第四章 大白菜遗传转化体系的建立和转基因植株的获得

4．1 材料和方法

4．1．1 植物材料和菌株

4．1．2 主要试剂

4．1．3 主要仪器

4．1．4 培养基的配制

4．1．5 外植体的准备与转化

4．1．6 影响农杆菌转化的因素

4．1．7 Kan浓度对生根培养基的影响

4．1．8 抗性株系的分子检测

4．2 结果和分析

4．2．1 影响农杆菌转化的因素

4．2．2 转基因株系的获得

4．2．3 抗性株系的分子检测

4．3 讨论

参考文献

附录

攻读学位期间取得的研究成果

致谢

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