K-ras基因突变状态与结直肠癌生物学行为关系及与FOLFOX不良反应的相关性分析

摘要

在中国结直肠癌(colorectai canceq CRC)是常见的恶性肿瘤之一，在恶性肿瘤中的发病率位居第4位。近年来，结直肠癌的发病率逐渐增高，具有年轻化趋势，是肿瘤相关死亡原因的第二大原因。
　　手术治疗是结直肠癌最有效的治疗手段，化疗和放疗则是对手术治疗的一个有益的补充。由于仅有70％的结直肠癌患者确诊时可以行根治性切除，而且约40％的Ⅱ、Ⅲ期患者可产生术后复发，因而化疗对于这部分患者起着非常重要的作用。5-FU是过去几十年中结直肠癌化疗的主要药物，近年来，随着伊立替康、奥沙利铂等新药的出现，晚期结直肠癌患者的生存率明显提高。
　　大量实验表明，多个癌基因的激活或抑癌基因的失活与结直肠癌的发生有关，Ras癌基因便是其中之一。Ras癌基因家族由K-ras、H-ras和N-ras三个密切相关的成员组成，并且绝大多数的点突变产生在其1号外显子的第12和第13密码子上。三个基因中，K-ras基因状态可以用来预测靶向药物抗EGFR抗体的疗效，是结直肠癌患者进行靶向治疗方案选择的重要指标之一。《2013(NCCN)结肠癌临床实践指南》指出，采用靶向治疗前应当对患者进行K-ras基因突变检测。
　　K-ras基因突变能否预测常规化疗的化疗效果及预后，尚缺乏预见性的指标，目前无一致定论。因此，本课题从分子水平上揭示结直肠癌K-ras基因的变化，揭示K-ras基因的生物学行为，并揭示K-ras基因突变与FOLFOX化疗的不良反应的相关性，探讨K-ras基因突变能否预测常规化疗的不良反应。
　　目的:
　　本课题通过荧光定量PCR法与直接测序法分别检测结直肠癌K-ras基因突变，对比荧光定量PCR方法与直接测序法优越性;探讨K-ras基因突变与结直肠癌生物学行为的关系;K-ras基因突变状态是否能够预测结直肠癌FOLFOX化疗的不良反应。
　　方法:
　　选取山东省肿瘤医院2011年12月1日至2012年10月31日结直肠癌行手术治疗患者200例，包括患者一般情况（年龄、性别等），术后明确病理诊断，术后根据病情选择进行FOLFOX方案化疗，均未接受抗EGFR抗体治疗。每化疗一个周期结束后对患者进行KPS评分，不良反应按WHO推荐抗癌药物常见不良反应分级标准进行评价，并将具体情况进行记录。试验将手术中切出的病理组织进行基因测序，分别采用荧光PCR检测法与直接检测法，比较两种测序方法的结果，分析结直肠癌K-ras基因突变状态的生物学行为，结直肠癌K-ras基因突变状态与FOLFOX化疗不良反应的相关性分析。本试验采用SPSS17.0统计学软件进行X2检验，分析不同结直肠癌K-ras基因状态与肿瘤大小、分化程度、浸润深度、TNM分期、CEA水平的关系，探索FOLFOX化疗不良反应是否与不同结直肠癌K-ras基因状态存在相关性。
　　结果:
　　200例结直肠癌组织中K-ras基因突变者73例(73/200，36.5％)，其中12密码子突变52例(52/200，26％)，13密码子突变者21例(21/200，10.5％)。
　　K-ras基因突变率在不同年龄段（＜50岁和＞50岁）、不同性别的患者中的差异无统计学意义;不同肿瘤大小、部位、肿瘤细胞的分化程度及肿瘤浸润深度的K-ras基因突变率无明显差异(P＞0.05);不同TNM分期的K-ras基因突变率有明显差异，且差异具有统计学意义(P＜0.05)。
　　118例结直肠癌患者接受FOLFOX方案化疗共1002例。化疗引起的不良反应主要表现为:Ⅰ～Ⅱ度的胃肠道反应、感觉神经异常、骨髓抑制及肝功能异常等症状，化疗间隙期可恢复。全部患者均未出现肾脏及心脏毒性，未发生因严重不良反应延迟或停止化疗。K-ras基因状态与结直肠癌术后辅助化疗FOLFOX的不良反应无明显相关性(P＞0.05)。
　　结论:
　　1.实验证明在结直肠癌组织中存在K-ras基因的点突变，突变率为36.5％;突变主要发生于12密码子，突变的主要类型:12密码子的第二个G突变为T或突变为A;
　　2.不同肿瘤大小、部位、分化程度及浸润深度，K-ras基因突变率无明显差异(P＞0.05)，不同TNM分期的K-ras基因突变率有明显差异，且差异具有统计学意义(P＜0.05); K-ras基因的突变可能赋予肿瘤一定的浸润性，使肿瘤具有转移倾向。
　　3.K-ras基因不同突变状态在结直肠癌FOLFOX化疗，其不良反应无明显差异;结直肠癌K-ras基因的突变状态不能预测患者的化疗反应。
　　因此，K-ras基因突变可作为一个分子标记，可作为判断结直肠癌恶性程度和是否有转移倾向的重要指标;尚不能预测患者化疗的不良反应。

目录

声明

摘要

主要符号缩略表

第一章 前言

第二章 材料与方法

2．1 实验资料

2．2 研究对象与方法

2．3 荧光定量PCR检测K-ras基因突变

2．4 直接测序法检测K-ras基因突变

2．5 统计学分析

第三章 结果

3．1 荧光定量PCR检测与直接测序法的比较

3．2 K-ras基因突变状态与结直肠癌生物学行为的关系

3．3 K-ras基因突变状态与结直肠癌FOLFOX疗效的相关性分析

3．4 附表

第四章 讨论

4．1 荧光定量PCR方法与直接测序法的比较

4．2 结直肠癌与K-ras基因突变

4．3 K-ras基因与结直肠癌治疗

第五章 结论与展望

参考文献

综述

攻读硕士学位期间取得的研究成果

致谢