丙型肝炎病毒核心蛋白对人源性肝细胞凋亡及自噬的影响

摘要

目的:
　　构建丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白真核表达载体pIRES-core，转染至体外培养的人源性肝细胞QSG7701，研究丙型肝炎病毒核心蛋白对QSG7701细胞凋亡及自噬的影响。初步探讨丙型肝炎病毒核心蛋白在丙型肝炎和肝细胞癌中的致病机制。
　　方法:
　　体外培养人源性肝细胞QSG7701，将细胞分为QSG7701组（未转染组）、QSG7701/pcDNA3.1组（转染空质粒组）及QSG7701/core组（转染pIRES/core组）。然后通过脂质体转染法将HCV核心蛋白真核表达载体pIRES-core转染至QSG7701细胞中。AnnexinV-FITC/PI双染倒置荧光显微镜下观察凋亡细胞的细胞核变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blotting印记法检测HCV核心蛋白及转录因子NF-κB的表达;采用小分子干扰RNA(siRNA)技术抑制肝细胞NF-κB表达，流式细胞仪再次检测三组细胞凋亡率。Western blotting印记法检测自噬体标记分子LC3及自噬相关基因Beclin-1的表达。
　　结果:
　　Annexin V-FITC/PI双染法倒置荧光显微镜下观察凋亡细胞的细胞核变化，可见PI将凋亡细胞的细胞核染成红色，细胞核大小不等，出现核固缩、核碎裂、核溶解等细胞凋亡的特异性表现;流式细胞仪检测显示QSG7701/core组细胞凋亡率为（1.34±0.07）％，低于QSG7701组（未转染组）（2.35±0.11）％和QSG7701/pcDNA3.1组（转染空质粒组）（2.58±0.13）％，三组比较差异有统计学意义（P＜0.05）;Western blotting印记法检测转录因子NF-κB在QSG7701/core组表达上调;将QSG7701细胞分为正常对照组（不作处理）、阴性对照组（转染阴性siRNA组）及siRNA组（转染NF-κB siRNA组），小分子干扰RNA(siRNA)技术抑制肝细胞NF-κB表达，流式细胞仪再次观察凋亡率，siRNA组凋亡率为（2.38±0.17）％，高于正常对照组(1.20±0.11)％和阴性对照组（1.29±0.09）％，三组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。Western blotting法检测自噬泡标记分子LC3及自噬相关基因Beclin-1在QSG7701/core组表达上调。
　　结论:
　　HCV核心蛋白能够抑制人源性肝细胞QSG7701的细胞凋亡，其主要机制可能是转录因子NF-κB表达上调。HCV核心蛋白可提高QSG7701的细胞自噬水平，其主要机制可能是自噬相关基因Beclin-1表达上调。

目录

声明

摘要

符号说明

第一部分 丙型肝炎病毒核心蛋白对人源性肝细胞凋亡的影响

前言

一 材料

二 方法

三 结果

四 讨论

第二部分 丙型肝炎病毒核心蛋白对人源性肝细胞自噬的影响

前言

一 材料

二 方法

三 结果

四 讨论

结论

参考文献

综述 丙型肝炎病毒核心蛋白与NF-κB及JNK／SAPK信号转导通路

攻读硕士学位期间取得的研究成果

致谢