丙型肝炎病毒核心蛋白人源抗独特型单链抗体在大肠杆菌中的表达

摘要

目的在大肠杆菌中表达丙型肝炎病毒核心蛋白人源抗独特型单链抗体.方法采用噬菌体表面展示技术,将丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白单克隆抗体固相包被于Nunc板.从人源噬菌体单链可变区抗体库中经过3轮"吸附-洗脱-扩增"的筛选,获得结合活性较强的人源HCV核心蛋白抗独特型(抗-Id)scFv阳性克隆.从阳性克隆中提取质粒,经Sfi I/NotI酶切鉴定后,亚克隆到pCANT-AB5E载体,转化大肠杆菌XL1-Blue,应用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达可溶性的HCV核心蛋白抗独特型单链可变区抗体.酶联免疫吸附法(ELISA)证实表达的HCV核心蛋白抗-ID scFv具有与HCV核心蛋白单克隆抗体反应的特异性.对转化的大肠杆菌XL1-Blue上清中表达的HCV核心蛋白抗-Id scFv进行硫酸铵沉淀,并进行SDS-PAGE电泳.结果筛选得到的HCV核心蛋白抗-IdscFv片段基因由774bp组成.SDS-PAGE电泳表明,大肠杆菌XL1-Blue中表达的可溶性HCV核心蛋白抗-Id scFv分子量约28kD.结论HCV核心蛋白抗-Id scFv与HCV核心蛋白抗-Id scFv单克隆抗体具有较强的结合活性和特异性.HCV核心蛋白抗-Id scFv的筛选和表达成功,为今后HCV核心蛋白抗-Id scFv的研究和应用奠定了基础.