大剂量埃克替尼联合多西他赛对非小细胞肺癌EGFR野生型荷瘤小鼠治疗效果的相关研究

摘要

背景与目的：肺癌是目前全球死亡率最高的肿瘤疾病，近年来，其发病率呈逐年上升的趋势。目前依据生物学行为的差异，通常大致分为两类：非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer， NSCLC），占所有肺癌病例的80-85％左右；小细胞肺癌（small cell lung cancer， SCLC），占所有肺癌病例的15-20%左右。随着基因时代的到来，肺癌相关的驱动基因，如表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）、间变性淋巴瘤激酶（anaplasticlymphoma kinase，ALK）相继被发现，靶向治疗发展迅速，成为临床应用及研究的热点。
　　近年多个随机多中心的III期临床试验比较了酪氨酸激酶抑制剂（tyrosine kinase inhibitor，TKI）与常规化疗的疗效差异。数据表明，EGFR突变的NSCLC患者接受TKI作为一线治疗的反应率（response rate，RR）和无进展生存期（progression-free survival，PFS）明显优于接受化疗的患者，尽管总生存期（overall survival，OS）在两种治疗方案之间并没有显著性的差异。然而，EGFR突变仅占一小部分。在白人人口EGFR突变占21%，在亚洲人口EGFR突变占40%。这意味着EGFR野生型的NSCLC肺癌仍占多数。NCCN指南指出，对于EGFR突变型的NSCLC患者一线应用酪氨酸激酶抑制剂治疗，而EGFR野生型的NSCLC患者可采用化疗。而传统的化疗的疗效已达到平台期，即，并不能够改善大多数患者的远期治疗结局。因而为EGFR野生型的NSCLC患者寻找新的有效的治疗方案迫在眉睫。
　　本课题为通过动物实验探索大剂量埃克替尼联合多西他赛的针对EGFR野生型肿瘤的疗效及最佳给药顺序，通过选取种植有EGFR野生型A549肿瘤细胞株的荷瘤小鼠为研究对象，分别给予不同剂量埃克替尼以不同顺序联合多西他赛，给药结束后剥离肿瘤，检测细胞凋亡相关蛋白、微血管密度情况观察正常剂量与大剂量埃克替尼不同顺序联合多西他赛的抗肿瘤效果，确定大剂量埃克替尼与多西他赛最佳用药顺序，为临床合理用药提供理论依据。
　　方法：建立EGFR野生型A549肿瘤细胞株的荷瘤小鼠模型，并按实验设计随机分为5组，即对照组，单药组（DTX、IcoH、IcoN），埃克替尼提前组（IcoH-DTX、IcoN-DTX），同时组（IcoH+DTX、IcoN+DTX）以及多西他赛提前组（DTX-IcoH、DTX-IcoN）。测量肿瘤体积变化，绘制肿瘤生长曲线，计算抑瘤率；用western blot方法测定细胞凋亡相关蛋白含量。
　　结果：
　　1、体积变化和抑瘤率（1）单药组大剂量埃克替尼抑瘤率优于正常剂量埃克替尼（P<0.05），不及多西他赛组（P<0.05）；（2）不同用药顺序组中无论用药顺序如何，大剂量埃克替尼抑瘤率优于正常剂量埃克替尼（P<0.05），正常剂量埃克替尼联合多西他赛抑瘤率与多西他赛单药组无显著性差异（P>0.05）；（3）大剂量埃克替尼提前组抑瘤率最优（P<0.05）。
　　2、细胞凋亡相关蛋白（1）多西他赛和不同剂量埃克替尼对A459细胞非磷酸化的EGFR、AKT、MAPK表达无明显影响；（2）埃克替尼可抑制EGFR、AKT、MAPK的磷酸化，大剂量明显；而多西他赛对其无影响；（3）相比多西他赛单药，多西他赛与埃克替尼联合应用AKT磷酸化无明显变化，多西他赛诱导的EGFR及MAPK的磷酸化明显被联合应用的埃克替尼抑制，大剂量明显；（4）不同用药顺序中，埃克替尼提前应用组EGFR、AKT、MAPK表达及其磷酸化抑制相对明显于同时组以及多西他赛提前组。
　　3、微血管密度（1）大剂量埃克替尼与多西他赛联合应用较其他实验组明显降低（P<0.05），但大剂量埃克替尼在多西他赛之前、之后或者同时应用组CD34表达无差异有统计学意义（P>0.05）；（2）正常剂量埃克替尼与多西他赛联合应用较正常剂量埃克替尼单药组明显降低（P<0.05），但正常剂量埃克替尼在多西他赛之前、之后或者同时应用组与多西他赛单药组CD34表达无差异有统计学意义（P>0.05）；（3）大剂量埃克替尼单药组相对于空白对照组CD34表达明显降低（P<0.05），但不及多西他赛单药组（P<0.05）；（4）正常剂量埃克替尼单药组与空白对照组CD34表达无差异有统计学意义（P>0.05）。
　　结论：大剂量埃克替尼序贯多西他赛对EGFR野生型A549肿瘤细胞株的荷瘤小鼠的肿瘤生长以及细胞凋亡相关蛋白有明显影响。