C35蛋白在辛伐他汀诱导人结肠癌细胞凋亡中的作用及其机制

摘要

研究目的：
　　结肠癌是消化道最常见的恶性肿瘤，在发达中国家中占所有恶性肿瘤的第三位，在我国虽然发病率并不是很高，但是随着生活条件的改变以及诊断技术的提高，我国结肠癌的发病率也在逐年增加。尽管结肠癌的早期诊断和治疗方法包括手术、放疗、化疗等治疗上有明显的提高，但患者的5年生存率仍然不足60％，死亡率仍在增加，找到新的有效的治疗方法至关重要。靶向治疗是目前新发现的新的治疗方法，其特异性的针对肿瘤细胞作用，对正常细胞影响较小，所以开发靶向治疗药物是一个新的研究方向。
　　研究方法：
　　1.选取人结肠癌细胞株LoVo及HT29进行培养。
　　2.通过反转录方法、SDS-PAGE测定结肠癌细胞株中C35mRNA、蛋白是否表达。
　　3.MTT法检测辛伐他汀的抑制作用。
　　4.real-time PCR检测C35基因mRNA的表达。
　　5.Westen blot检测C35蛋白用药前后表达差异。
　　研究结果：
　　1.反转录后测得C35基因在细胞株表达，并将所得产物纯化进行测序，结果通过与blast对比确定该表达的基因为 C35基因。用全蛋白提取试剂盒提取结肠癌细胞蛋白， SDS-PAGE测得在12kDa处有蛋白表达。
　　2.抑制率与时间和浓度呈正相关，随着时间的增长和浓度的增加，其抑制率也在逐渐增大。
　　3.被辛伐他汀作用后细胞株中 C35mRNA是未被作用的的1/8-1/20，说明被辛伐他汀作用后C35mRNA表达降低，结果具有显著地统计学意义。
　　4.被辛伐他汀作用后细胞株中C35蛋白条带与未被作用的相比呈明显呈减弱趋势，相对蛋白灰度统计分析P＜0.05，说明被辛伐他汀作用后C35蛋白表达降低，结果具有统计学意义。
　　研究结论：
　　早期实验证明，C35mRNA、蛋白均在结肠癌中高表达，且在癌症的发生发展中起很重要的作用，是监测结直肠癌发生的一个新的重要靶点。辛伐他汀可以有效地作用于该靶点并使肿瘤细胞凋亡，给结肠癌的临床治疗提供了新的思路。

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英文摘要

主 要 符 号 表

前言

1 材料与方法

1.1 材料

1.2 方法

2 结果

2.1 C35基因在结肠癌细胞株LOVO、HT-29中的表达

2.2 反转录PCR产物的测序

2.3 C35蛋白在结肠癌细胞株LOVO、HT-29中的表达

3 讨论

第二部分 辛伐他汀对C35蛋白的抑制

1 材料与方法

1.1 材料

1.2 方法

2 结果

2.1 辛伐他汀对结肠癌细胞株的抑制

2.2 辛伐他汀对结肠癌细胞株中C35mRNA的影响

2.3 辛伐他汀对结肠癌细胞株中C35蛋白的影响

3讨论

结论

参考文献

附录

攻读学位期间取得的研究成果

致谢