海洋白浅灰链霉菌Streptomyces albogriseolus A2002抗肿瘤活性成分的研究

摘要

该文自采自胶东半岛沿海的24个海泥、海水样品中共分离、纯化出236株海洋放线菌,采用tsFT210小鼠乳腺癌温度敏感型细胞对这些菌株进行了体外抗肿瘤活性筛选,经过反复筛选共有9株放线菌活性稳定,阳性率为3.8﹪,其中3株为G<,0>/G<,1>周期抑制活性,5株为G<,2>/M期周期抑制活性,1株为细胞毒活性.A2002表现为强的细胞周期抑制活性,通过初发酵预实验,活性稳定,被确定为目的菌株,发酵7天其活性和菌丝体量达到最高.经中科院微生物所鉴定该菌为白浅灰链霉菌(Streptomyces albogriseolus).以tsFT210细胞系活性筛选模型为向导,采用跟踪活性部位进行分离的方式,确定了发酵物乙酸乙酯提取物的活性部位.利用硅胶柱层析、反相硅胶柱层析、Sephadex LH-20、HPLC等多种分离手段从A2002两次发酵产物乙酸乙酯提取物中分离纯化到5个化合物.根据理化性质和波谱数据鉴定了它们的结构,分为两类化合物,一类为三环缩醛内酯素类化合物,命名为5-羟基三环缩醛内酯素(1),三环缩醛内酯素(2);一类为环二肽类化合物,命名为丙氨酸-脯氨酸环二肽(3),丙氨酸-缬氨酸环二肽(4),脯氨酸-酪氨酸环二肽(5).以tsFT210小鼠乳腺癌细胞,采用SRB法测定化合物1和2的细胞增殖抑制活性,并结合流式细胞术测定及配以光学显微镜细胞形态学观察,系统地测试了化合物1-5的细胞周期抑制活性.结果表明,化合物1和化合物2真有细胞周期抑制活性、诱导细胞凋亡和细胞毒性作用,且其活性具有量效依赖关系.1,2在低浓度时为G<,2>/M期抑制活性,在中浓度为诱导细胞凋亡活性,而在高浓度为细胞毒活性,化合物1的活性强于化合物2,在此活性筛选模型下化合物3,4,5无明显抗肿瘤活性,其中化合物2为新化合物.

目录

缩略语表

摘 要

ABSTRACT

前言

第一章海洋放线菌的分离及抗肿瘤活性菌株的筛选

第一节海洋放线菌的分离

一、实验试剂与仪器

二、海洋放线菌的分离

三、小结与讨论

第二节海洋放线菌抗肿瘤活性菌株的筛选

一、tsFT210筛选模型及其方法

二、活性筛选结果

三、小结与讨论

第三节活性菌株A2002的发酵培养预实验

一、活性菌株A2002发酵培养预实验

二、活性菌株A2002的时效曲线

三、小结与讨论

第二章白浅灰链霉菌A2002抗肿瘤活性成分的研究

第一节生产菌的鉴定

第二节实验试剂、仪器及活性检测方法

第三节实验菌株A2002的培养发酵

第四节A2002代谢产物的活性追踪分离

第五节小结与讨论

第三章单体化合物的结构研究

第一节单体化合物的结构研究

第二节实验部分

第三节小结与讨论

第四章单体化合物生物活性研究

第一节单体化合物生物活性测试结果

第二节实验部分

第三节小结与讨论

结语

致谢

海洋微生物大环内酯化全物研究进展

参考文献

附图