海带细胞工程育苗的生产应用研究

摘要

传统的海带夏苗培育方法是以海带生活史为依据建立的,此方法自60年代初建立以来,延用至今.随着现代细胞工程技术的迅速发展,细胞工程育苗即配子体无性繁殖系育苗方法成为目前海带育苗生产中的崭新技术.本文主要从生产应用角度,通过对细胞系增殖特点、附苗特点的研究,系统探讨了海带细胞系扩增培养、附苗、育苗各环节的关键技术.一、细胞系扩增培养:在20L广口瓶中,接种浓度0.5g/L,提供适宜的生长条件,进行细胞系生长试验,通过回归分析得y=-0.1118+1.3108x+0.085x<'2>-0.0006x<'3>(R2=0.9985),用于估算克隆生产量(其中y是鲜重,x是天数).通过对不同密度克隆对营养盐的消耗研究,实验表明当克隆的密度较小时,N6ppm、P1ppm、每周换水一次,可满足其生长需要;克隆密度较大时,N10ppm、P2ppm、每周换水一次,可满足其生长需要.在充气悬浮培养条件下克隆的瞬时生长率明显高于静置培养.二、附苗:采苗前,将♀♂配子体克隆混合并由长光照(连续光照)转入短光照(光期L:D 10:14)培养,连续观测克隆生长情况,结果显示,进入配子体发育阶段需11天时间,细胞增加量达40％;以孢子体发生时间和发生率为指标,研究不同♀♂比例的配子体发育情况,结果显示,1:1和3:1比较接近,5:1以上配比出现了孢子体发生时间延迟、发生率降低和孤雌生殖现象;通过不同克隆喷洒量的孢子体发生密度实验,3g/帘(♀系)与孢子采苗(孢子附着密度20~25/160X)的发生密度接近;干帘喷洒、干帘浸泡和间接喷洒的采苗方法比较显示,间接喷洒法简便易行、孢子体发生整齐.三、育苗:海带细胞系育苗生产中,在采苗结束时采取附苗后静水、24h后微流水(表层流速5cm/s以下)、72h后正常流水;孢子体生长到8~16列c时开始以0.5kg/cm2的压力洗刷,随着孢子体的生长及附着力的提高逐渐增加洗刷强度和次数;同时采用常规育苗生产中的温、光、盐等技术措施,进行幼苗培育.本文还对细胞工程育苗和传统育苗的两种大孢子体主要经济性状进行统计学分析,从遗传角度证明前者种群变异程度明显小于后者.

目录

前 言

第一章海带配子体大规模培养技术研究

1材料和方法

1.1材料来源

1.2培养室条件

1.3生长试验

1.4换水试验

1.5扩种试验

2结果与讨论

2.1生长情况

2.2换水试验

2.3扩种试验

3小 结

第二章海带细胞系育苗生产中采苗技术的研究

1材料和方法

1.1材料

1.2试验场所

1.3丝状体分离方法

1.4采苗方法

2结果与分析

2.1♀♂细胞系混合并由长日照转入短日照的生长状况

2.2丝状体分离方法试验

2.3雌雄比试验

2.4喷洒量试验

2.5采苗方法实验

3讨论

3.1均匀问题

3.2牢固问题

3.3喷洒量

第三章海带细胞系育苗中幼苗培育技术的研究

1材料与方法

1.1材料

1.2试验场所

1.3方法

2结果与分析

2.1采苗后生长发育情况

2.2附苗后附着能力试验

2.3洗刷开始时机及洗刷压力试验

2.4两种育苗方法出苗结果

2.5两种育苗方法孢子体变异情况

3讨论

3.1流水

3.2洗刷

3.3病害

3.4育苗时间

参考文献

图版

致谢