扁玉螺食道腺蛋白酶定位及提取纯化、理化性质的初步研究

摘要

扁玉螺(Neverita didyma)(Roeding,1798)隶属于扁玉螺属(NeveritaRisso),乳玉螺亚科(Polinicinae),玉螺科(Naticidae),中腹足目(Mesogastropoda),前鳃亚纲(Prosobranchia),腹足纲(Gastropoda),软体动物门(Mollusca)。 该螺属广温性种类,我国南北沿海均有分布。因为其为肉食性螺类,喜食一些双壳类,故一直被认为对海水养殖的牡蛎和蚶类等贝类幼苗等种类有害,具有高蛋白、低脂肪等特性,是一种受欢迎的水产品。 对于扁玉螺的研究多集中在形态结构、组织化学、植食消化特性。据研究发现,扁玉螺的食道腺是一个发达的腺体,蛋白酶活性较强。由于扁玉螺的主要食物蛋白质含量很高以及它特殊的钻孔取食方式,所以推测这种蛋白酶可能具有很高的活性和特殊的理化性质。而且对于软体动物蛋白酶提取纯化及纯化后蛋白酶的理化性质研究也很少,因此研究扁玉螺食道腺中的蛋白酶的纯化方法及其理化性质具有一定的理论意义和潜在应用价值。 本文进行了下列工作:运用组织化学和冰冻切片技术,观察了扁玉螺食道腺的结构,对蛋白酶进行定位;通过35[％]～75[％]硫酸铵分级沉淀,并采用DEAESepharose Fast Flow离子交换层析与Sephacryl S200凝胶过滤柱层析对扁玉螺食道腺蛋白酶进行提纯,并对纯化后的扁玉螺食道腺蛋白酶的理化性质进行了研究。 扁玉螺食道腺中无导管,分枝状腺腔汇集而直接与食道相通。冰冻切片的阳性反应区域较大,说明食道腺中分泌大量的蛋白酶。 提纯后的蛋白酶用SDS-PAGE电泳检测,分子量大约为36.5kDa。扁玉螺食道腺蛋白酶纯酶的适宜温度约为15～50℃,适宜pH值为5.0～10.0,最适反应温度、pH值为37℃、pH6.0。Ca<'2+>、Mg<'2+>对酶活有激活作用,Cu<'2+>、Ag<'2+>、Hg<'2+>对酶活有不同程度的抑制作用。 扁玉螺食道腺蛋白酶作为一种广温性蛋白酶以及适应酸性环境的蛋白酶,具有一定的开发利用价值,其提纯技术路线也可为海产贝类蛋白酶的提纯提供参考。

目录

文摘

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第一章文献综述

第二章扁玉螺食道腺蛋白酶的定位

第三章扁玉螺食道腺蛋白酶的提取纯化和理化性质的初步研究

结论

参考文献

致谢