久效磷对金鱼（Carassius auratus）的遗传毒性研究

摘要

久效磷能够诱导雄性金鱼卵黄原蛋白的产生，具有环境雌激素效应和生殖毒性，但关于久效磷遗传毒性的研究报道还很少。本文以金鱼(Carassius Auratus)为试验对象，研究了久效磷对金鱼DNA的损伤，从久效磷导致DNA损伤的类型、导致DNA氧化损伤的量、对抗氧化酶的影响以及对端粒DNA的损伤四个方面探讨了久效磷对金鱼的DNA损伤的机理，为筛选农药的遗传毒性提供理论依据。 0.01、0.10和1.00mg/L久效磷暴露金鱼24h，金鱼的外周血细胞和肝细胞DNA的损伤与对照相比显著升高；暴露48h时损伤达到峰值；暴露96h，损伤有所减轻；1周后损伤降到最低，但与对照相比仍存在极显著差异。在相同的暴露时间下，金鱼外周血细胞DNA损伤随着久效磷暴露浓度的升高而加重，具有剂量一效应关系。 通过不同pH条件下的单细胞凝胶电泳和在电泳中添加EndoⅢ和FPG酶处理发现：久效磷暴露48h，导致了金鱼外周血细胞和肝细胞DNA单链断裂、双链断裂，产生碱不稳定位点，而碱不稳定位点的大量产生是DNA损伤的主要类型；久效磷可以导致金鱼外周血细胞和肝细胞DNA中氧化嘧啶和嘌呤的量显著升高。 久效磷暴露可以造成金鱼外周血和肝脏氧化压力的升高。金鱼外周血GPH-Px随着暴露时间延长先降低再升高，96h达到峰值；肝脏的GPH-Px活性变化趋势也是先降低再升高，在1周达到峰值。金鱼外周血SOD活性无显著变化；肝脏的SOD活性先降低再升高，1周达到峰值。外周血MDA含量24h降低，48h升高达到峰值，随后逐渐降低；而肝脏MDA含量24h显著升高并达到峰值，随后逐渐升高。 久效磷暴露48h可以导致金鱼外周血红细胞端粒DNA的损伤，并且随着暴露浓度的增加，端粒DNA损伤加重，而端粒对氧化损伤比较敏感，又进一步佐证了久效磷导致DNA损伤主要为氧化损伤。 综上所述，久效磷对金鱼具有遗传毒性作用，造成了金鱼外周血细胞和肝细胞DNA的损伤，DNA的损伤类型为单链断裂、双链断裂和碱不稳定位点，且碱不稳定位点为久效磷导致DNA损伤的主要形式；久效磷导致了金鱼氧化嘌呤和嘧啶量的显著增加，说明其造成金鱼DNA的氧化损伤；久效磷可以导致金鱼外周血和肝脏氧化压力的升高；同时，久效磷暴露48h能够导致金鱼外周血端粒的损伤，而端粒对氧化损伤比较敏感，因此，本文研究结果表明久效磷对金鱼DNA的损伤主要为氧化损伤。

目录

文摘

英文文摘

声明

0前言

1有机磷农药的遗传毒性研究进展

1.1有机磷农药污染现状

1.1.1有机磷农药概况及使用现状

1.1.2有机磷农药对水体的污染

1.2有机磷农药遗传损伤的类型

1.2.1基因突变

1.2.2染色体损伤

1.2.3 DNA损伤

1.3有机磷农药遗传毒性检测方法进展

1.3.1 DNA链断裂检测方法

1.3.2荧光原位杂交技术

1.3.3 RAPD技术

1.4主要有机磷农药遗传毒性研究进展

1.4.1甲基对硫磷

1.4.2甲胺磷

1.4.3久效磷

1.5有机磷农药遗传毒性机制的研究

1.5.1氧化损伤

1.5.2烷基化

1.6已检测具有遗传毒性作用的有机磷农药

1.7研究展望

1.7.1有机磷农药遗传毒性机制的研究

1.7.2模式动物的开发

1.7.3开展现场监测

1.7.4发展遗传毒物的筛选标准化方法

1.8本课题研究内容设计

2久效磷对金鱼DNA的损伤

2.1材料与方法

2.1.1试验动物

2.1.2试验药品和仪器

2.1.3试验方法

2.1.4数据处理

2.2结果与分析

2.2.1久效磷对金鱼外周血DNA的损伤

2.2.2久效磷对金鱼肝脏DNA的损伤

2.3讨论

2.4小结

3久效磷对金鱼DNA损伤机理的初步研究

3.1材料与方法

3.1.1试验动物

3.1.2试验药品和仪器

3.1.3试验方法

3.1.4数据处理

3.2结果与分析

3.2.1不同pH条件下久效磷对外周血和肝脏DNA的损伤

3.2.2 EndoⅢ和FPG处理条件下，久效磷对外周血和肝脏DNA的损伤

3.3.3久效磷对金鱼外周血和肝脏GSH-Px、SOD活性和MDA含量的影响

3.3讨论

3.4 小结

4久效磷对金鱼端粒DNA的损伤

4.1材料与方法

4.1.1试验动物

4.1.2试验药品和仪器

4.1.3试验方法

4.2结果与分析

4.3讨论

4.4小结

参考文献

致谢

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