沙棘中α-葡萄糖苷酶抑制剂的筛选

摘要

实验选用中国沙棘（Hippophae rham noides L.subsp.chinensis Rousi）枝叶为研究材料，利用酶-抑制剂筛选模型、对沙棘中的活性部位进行AGI筛选，选择高活性的AGI部位，进行体外酶学动力学研究、体内小鼠耐糖量模型和糖尿病小鼠模型实验研究，探索高活性的AGI部位对血糖的影响及其作用机理。现将主要的研究内容和结果详细介绍如下：
　　 1.依次用极性不同的溶剂乙酸乙酯、甲醇、蒸馏水从沙棘粗粉中提取，得到三个不同提取部位；用乙醇回流热水浸法提取，Sevage法除蛋白，得到沙棘粗多糖。乙酸乙酯、甲醇、蒸馏水和沙棘粗多糖提取得率分别为1.52％、1.71％、2.41％和2.79％。
　　 2.利用AGI的筛选模型，分别对四个不同提取部位进行AGI活性筛选。结果：乙酸乙酯、甲醇、蒸馏水和沙棘粗多糖抑制活性分别为20.34％、13.43％、71.28％和90.43％。
　　 3.选择高活性的沙棘粗多糖提取部位，采用硫酸-苯酚法测得沙棘粗多糖的含糖量为28.52％。并对沙棘粗多糖进行理化性质和体外酶学动力学研究，结果：沙棘粗多糖浓度在0.0098 mg/mL-0.625mg/mL之间时，酶的抑制率随着浓度的增大而升高，IC50。为0.01912mg/mL，浓度为0.625mg/mL时抑制率达92.52％，且与酶结合迅速，酸碱范围广，热稳定性好，沙棘粗多糖是一种高活性的竞争可逆性AGI，抑制常数Ki=5.26mg/mL。
　　 4.采用小鼠耐糖量模型，以沙棘粗多糖为实验药物，观察沙棘粗多糖对蔗糖、葡萄糖、麦芽糖、淀粉负荷剂量后的正常小鼠血糖影响，结果：与对照组比较，淀粉组血糖值降低较为明显（P<0.01），蔗糖组次之（P<0.05）。表明沙棘粗多糖能够提高正常小鼠的耐糖量；通过抑制肠道内的AG而发挥作用，体内降血糖作用与阿卡波糖相似。
　　 5.用四氧嘧啶糖尿病小鼠动物模型，观察沙棘粗多糖对高血糖小鼠的影响，结果：与模型组比较，给药2周和4周后，沙棘粗多糖高剂量组对高血糖小鼠降糖作用明显（P<0.01，P<0.05），降糖率分别为31.72％和45.70％，沙棘粗多糖低剂量组降糖作用次之（P<0.05，P<0.05），降糖率分别为28.02％和39.38％。表明沙棘粗多糖对四氧嘧啶致高血糖小鼠具有良好的降血糖作用，且作用强度与剂量呈相关性。
　　 6.用链脲佐菌素糖尿病小鼠动物模型，观察沙棘粗多糖对高血糖小鼠的影响，结果：与模型组比较，给药2周和4周后，沙棘粗多糖高剂量组对高血糖小鼠降糖作用明显（P<0.01，P<0.01），降糖率分别为33.14％和43.78％，沙棘粗多糖低剂量组降糖作用次之（P<0.05，P<0.05），降糖率分别为27.07％和36.43％。表明沙棘粗多糖对链脲佐菌素致高血糖小鼠具有良好的降血糖作用，且作用强度与剂量呈相关性。

目录

文摘

英文文摘

符号说明

序言

文献综述

第一章 α-葡萄糖苷酶抑制剂的研究进展

1.1 α-葡萄糖苷酶抑制剂的来源

1.2 α-葡萄糖苷酶抑制剂的药理作用

1.3 α-葡萄糖苷酶抑制剂的临床运用

第二章 治疗糖尿病药物的研究进展

2.1 胰岛素和胰岛素类似物

2.2 促胰岛素分泌的药物

2.3 胰岛素增敏剂

2.4 抑制碳水化合物吸收的药物

2.5 糖异生抑制剂

2.6 胰岛素降解抑制剂

2.7 醛糖还原酶(AR)抑制剂

2.8 葡萄糖激酶(GK)激活剂

2.9 α2-肾上腺素受体拮抗剂

2.10 其它

2.11 结语

第三章 糖尿病模型的研究进展

3.1 酶-抑制剂模型

3.2 建立糖尿病动物模型的研究

第四章 高原药用植物沙棘的研究进展

4.1 高原植物沙棘的生物学特点

4.2 有关沙棘的本草记载

4.3 沙棘植物的现代研究状况

4.4 沙棘的药理作用研究及临床运用

实验部分

第一章 沙棘不同活性部位的提取

1.1 材料和仪器

1.2 提取方法

1.3 结果与分析

第二章 沙棘中抑制α-葡萄糖苷酶活性部位的筛选

2.1 材料与仪器

2.2 实验方法

2.3 结果与分析

第三章 沙棘粗多糖含量测定和酶学动力学研究

3.1 材料和仪器

3.2 实验方法

3.3 沙棘粗多糖定性定量试验

3.4 沙棘粗多糖酶学动力学实验

第四章 沙棘粗多糖对小鼠血糖影响的研究

4.1 动物和试药

4.2 实验方法

4.3 结果与分析

结论

参考文献

致谢

作者简历

在读学位期间发表论文情况