水产品中氨基糖苷类抗生素高效液相检测方法的建立

摘要

氨基糖苷类抗生素(如新霉素、庆大霉素、卡那霉素、安普霉素等)具有广谱杀菌作用，在畜牧业中得到普遍的应用，但由于其本身的副作用，在动物组织中的残留就可能给人类带来很大的危害。人们开始越来越重视氨基糖苷类抗生素在动物源性食品中的残留，一些发达国家和食品法典委员会对氨基糖苷类抗生素的限量都作了很严格的规定，所以对氨基糖苷类抗生素检测方法的研究逐渐成为热点。本文建立了水产品中新霉素、庆大霉素的柱前衍生高效液相色谱检测方法，初步探索了氨基糖苷类抗生素多残留的柱后衍生高效液相检测方法。
　　 1建立了水产品中新霉素的柱前衍生高效液相检测方法。采用含有10％三氯乙酸和2％EDTA-Na2的磷酸二氢钾溶液提取水产品中的新霉素，样品离心后，正己烷去除脂肪，C18固相萃取柱净化，芴甲氧羰酰氯(FMOC-Cl)为衍生试剂，以乙腈和水(90:10)为流动相，荧光检测器检测，激发波长260nm，发射波长315nm，结果新霉素的峰面积和其浓度在0.04μg/mL～4.0μg/mL的范围内线性关系良好，相关系数为0.9999，检测限为0.04μg/mL，定量限为0.2mg/kg。鳗鱼肌肉样品3个添加水平0.2mg/kg、1.0mg/kg、10mg/kg的平均回收率在55％-81％之间，相对标准偏差在3.8％-38％之间。牙鲆肌肉样品3个添加水平0.5mg/kg、1.0mg/kg、10mg/kg的平均回收率在47％-79％之间，相对标准偏差在6％-27％之间。
　　 2建立了庆大霉素的柱前衍生高效液相检测方法。采用PBS提取水产品中的庆大霉素，TCA沉淀蛋白，样品离心，正己烷去除脂肪，C18固相萃取柱净化，芴甲氧羰酰氯(FMOC-Cl)为衍生试剂，以乙腈和水(85:15)为流动相，荧光检测器检测，激发波长为260nm，发射波长为315nm。在0.04μg/mL～4.0μg/mL范围内庆大霉素的峰面积与其浓度呈现良好的线性关系，相关系数r=0.9994，检测限为0.04μg/mL，定量限为0.1mg/kg。鳗鱼肌肉样品3个添加水平0.1mg/kg、1.0mg/kg、10mg/kg的平均回收率在75％-83％之间，相对标准偏差在2％-12％之间。牙鲆肌肉样品3个添加水平0.1mg/kg、1.0mg/kg、10mg/kg的平均回收率在63％-85％之间，相对标准偏差在5％-18％之间。
　　 3选用邻苯二甲醛(OPA)作为衍生试剂，柱后衍生的方法，探索了水产品中氨基糖苷类抗生素多残留的高效液相检测方法。采用了C18反相分析柱和钾阳离子交换柱作为高效液相分析柱，选择了钾阳离子交换柱的流动相，探讨了流动相比例，对牙鲆中的卡那霉素、安普霉素、庆大霉素、新霉素进行了检测。用8mL的含有10％三氯乙酸和2％的EDTA-Na2的磷酸二氢钾溶液提取牙鲆中的卡那霉素、安普霉素、庆大霉素和新霉素，样品离心，采用正己烷和氯仿同时去除脂肪，C18固相萃取柱净化，采用钾阳离子柱分离，柱后OPA衍生，荧光检测器检测，激发波长为330nm，发射波长为465nm，四种氨基糖苷类抗生素得到了有效的分离。

目录

文摘

英文文摘

谨献

0 前言

0.1 我国水产品质量安全情况

0.2 氨基糖苷类抗生素的危害

0.3 氨基糖苷类抗生素的结构和性质

0.4 氨基糖苷类抗生素的检测方法

0.4.1 微生物法

0.4.2 免疫分析法

0.4.3 仪器检测方法

0.4.4 其他的检测方法

0.5 目的和意义

1 水产品中新霉素的高效液相检测方法

1.1 引言

1.2 实验材料

1.2.1 实验试剂

1.2.2 实验溶液

1.2.3 实验仪器

1.3 实验方法

1.3.1 分析步骤

1.3.2 标准曲线的绘制

1.3.3 净化条件的选择

1.3.4 衍生化条件的选择

1.3.5 衍生产物的稳定性和过膜对检测的影响

1.3.6 回收率及变异系数的测定

1.4 结果与讨论

1.4.1 样品的提取

1.4.2 SPE小柱的优化

1.4.3 C18固相萃取净化条件的选择

1.4.4 流动相条件的选择

1.4.5 衍生化条件的选择

1.4.6 波长的选择

1.4.7 标准曲线、回归方程及最低检出限

1.4.8 样品的回收率及相对标准偏差

1.5 小结

2 水产品中庆大霉素的高效液相检测方法

2.1 引言

2.2 实验材料

2.2.1 实验试剂

2.2.2 实验溶液

2.2.3 实验仪器

2.3 实验方法

2.3.1 分析步骤

2.3.2 标准曲线的绘制

2.3.3 衍生条件的优化

2.3.4 不同液相分析柱的选择

2.3.5 回收率及变异系数的测定

2.4 结果与讨论

2.4.1 样品的提取

2.4.2 Ci8固相萃取净化条件的选择

2.4.3 衍生条件的优化

2.4.4 液相分析柱的选择

2.4.5 波长的选择

2.4.6 标准曲线、回归方程、回收率和相对标准偏差

2.5 小结

3 水产品中氨基糖苷类抗生素多残留高效液相检测方法的探索

3.1 引言

3.2 C18柱分离、柱后衍生测定氨基糖苷类抗生素的探索

3.2.1 实验材料

3.2.2 实验方法

3.2.3 结果和讨论

3.3 采用钾阳离子交换柱柱后衍生测定氨基糖苷类抗生素多残留的探索

3.3.1 实验材料

3.3.2 实验方法

3.3.3 结果和讨论

3.4 小结

4 结论

参考文献

致谢

个人简历

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