海产品中恩诺沙星残留的免疫胶体金层析现场快速检测技术

摘要

兽药残留愈来愈受到人们的关注，氟喹诺酮类药物是对较多细菌均具有抑制作用的广谱杀菌药，当前包括我国在内的大多数国家已开始禁止或限制氟喹诺酮类药物的使用。
　　目前免疫胶体金在兽药残留方面越来越凸显其检测的优势，受到大范围的推广使用，这一检测技术使得对很多不同样品的分析过程变得简便而又快速。目前已有报道显示市场上已经出现了相应的免疫胶体金检测试纸卡，但对于这些试纸卡的有效性、如何简化免疫检测的前处理，如何在实际检测的过程中避免反复的离心、净化等繁琐操作还没有明确的报道与研究。
　　本实验以大菱鲆为主要研究对象，利用三氯乙酸(TCA)消除鱼肉中蛋白的基质效应，使建立的前处理方法减少对大型仪器的利用率，检测时间缩短到三十分钟以内，检测灵敏度等主要性能且达到国家相关标准的要求。通过建立的简单有效快速的前处理方法，满足了现场快速检测的要求，进一步弥补了商品化试剂条普遍存在的前处理不合理问题。主要内容如下：
　　1、探索基质效应对免疫胶体金检测卡的影响，确定蛋白质是最大影响基质，进而利用三氯乙酸（TCA）去除鱼肉蛋白，确定三氯乙酸（TCA）去除蛋白的最佳浓度。经实验证明三氯乙酸（TCA）去除鱼肉蛋白最佳浓度为9％，免疫胶体金检测卡灵敏度提高。该方法去除蛋白的过程简单，不需要添加复杂的化学物质，能在较短的时间内使其蛋白变性而快速沉淀。
　　2、优化前处理条件，确定最佳实验方案包括：实验装置与药残提取剂的优化；初步确定恩诺沙星药残检测的前处理方法及检出限（LOD），对初步建立的前处理方法采用HPLC法测定其回收率；进一步确定环丙沙星药残检测的前处理方法及检出限（LOD）；终方法对样本中恩诺沙星和环丙沙星的检出限，并将最终确定的方法应用于不同海产品检测。结果表明：确定优化后采用研钵充分研磨样本，针孔滤膜过滤样品提取液，pH试纸调节最终提取液pH；构建了以甲醇/PBS（1:1）与9%的TCA的混合液为提取剂，初步构建的前处理方法经高效液相回收率测定，回收率为40%~50%；建立的最终前处理方法操作时间在30分钟内，对大菱鲆样本中恩诺沙星和环丙沙星的检出限分别为10μg/kg、100ug/kg，大黄鱼和南美白对虾样本中恩诺沙星和环丙沙星的检出限与大菱鲆一致，能够满足国家对于动物性食品中恩诺沙星残留最高检出量的要求。说明该前处理方法基本建立成功。
　　3、将所建立的前处理方法在实际样品中验证，主要过程包括：稀释不同浓度恩诺沙星和环丙沙星标准溶液测定检测卡灵敏度与重复性、选取将3种沙星药物（诺氟沙星、达氟沙星、沙拉沙星）和两种其他抗生素药物（金霉素、土霉素）测定检测卡的特异性、实际样本同时采用本实验方法和HPLC检测方法检测，观察检测结果是否一致。结果表明：检测卡对恩诺沙星标准品和环丙沙星标准品的最低检测灵敏度分别在1μg/kg~5μg/kg和20μg/kg~50μg/kg之间。在3种沙星药物和2种抗生素标准液浓度为100μg/kg时，检测卡均呈现明显阴性结果，该检测卡具有很好的特异性；实际样本经本实验方法和高效液相的方法同时检测结果一致，均呈现阴性结果，可用于实际样本的验证。

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0 前言

0.1 喹诺酮类药物简介及其目前检测技术的研究进展

0.2免疫胶体金技术简介及研究开发现状

0.3免疫胶体金层析法检测FQs药物残留的研究现状

0.4 研究的目的与意义

0.5研究的内容与技术路线

1.海产品基质对于免疫胶体金检测的影响

1.1引言

1.2实验材料与仪器

1.3实验方法

1.4实验结果与讨论

1.5本章小结

2. 胶体金免疫层析法检测前处理过程的优化

2.1引言

2.2实验材料与仪器

2.3实验方法

2.4实验结果与讨论

2.5本章小结

3 该方法在实际样品中验证

3.1前言

3.2实验材料与仪器

3.3实验方法

3.4实验结果与讨论

3.5本章小结

4结论与创新点

4.1结论

4.2创新点

参考文献

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