液相色谱-飞行时间质谱法(LC-Q-TOF)对多种兽残同时检测方法探究

摘要

本论文建立了磺胺类、三苯甲烷类、氟喹诺酮类、林可胺类、大环内酯类、雌激素类和酰胺醇类共7类45种兽药残留的液相色谱-四级杆-飞行时间质谱LC-Q-TOF(LiquidChromatography-Quadrupole-Time of Flight Mass Spectrometer Detector)同时筛查分析检测方法。并对鱼、虾、贝类养殖水体中兽药残留情况进行了实际检测。具体内容如下:
　　7类45种兽药标准品的液相色谱-四级杆-飞行时间质谱LC-Q-TOF同时检测方法的建立。确定了最佳液相色谱分离条件，在ESI+电离模式和ESI-电离模式下，7类45种兽药经Agilent ExtendC18色谱柱分离，分别以含0.1％甲酸的5mmol/L乙酸铵-乙腈为流动相进行ESI+正离子采集和5mmol/L乙酸铵-乙腈为流动相进行ESI-负离子采集。确定了最佳质谱检测条件，在MS Scan模式下对7类45种兽药进行一级质谱全扫描，确定了每种兽药的保留时间和精确质量数;在TargetMS/MS模式下对7类45种兽药进行二级碎片离子全扫描，确定了每种兽药的最优碰撞能量及碎片离子信息，每种兽药的定性标准为至少有两个碎片离子且同分异构体间至少有一个碎片离子不同。结果显示，7类45种兽药的质量偏差均在5ppm以内，在1～500μg/L的浓度范围内线性关系良好，相关系数均大于0.99，保留时间RT偏差均小于0.2％，仪器检测限LOD为0.5～20μg/L，定量限LOQ为1～50μg/L;整个分析过程在40min内完成，且检测灵敏度、分离度和重现性均达到检测要求，为多种兽药残留的同时检测提供有力的技术支持和参考。
　　建立7类45种兽药的质谱数据库，确定最佳筛查参数。7类45种兽药的质谱数据库包括英文名称、简称、CAS号、分子式、电离类型、保留时间、母离子、不同碰撞能量下的高分辨二级质谱图等信息。确立了一级和二级全扫描的最优筛查参数，并以低浓度标准品为确证参考，验证了筛查条件的实际可行性。质谱数据库的建立为兽药多残留的高通量筛查检测奠定基础，为食品中未知物的筛查研究提供参考。
　　建立鱼、虾、贝实际养殖水体样品前处理方法和多种兽药残留同时检测方法。在样品前处理过程中采用甲醇和超纯水对其进行萃取柱活化，经Agela BAP-SPE固相萃取柱富集净化，甲醇、1％甲酸乙腈和10％甲醇乙酸乙酯依次洗脱，吹干后纯水-乙腈(V/V,9∶1)定容，完成前处理过程;目标物经Agilent Extend C18色谱柱分离后，分别以含0.1％甲酸的5mmol/L乙酸铵-乙腈为流动相进行ESI+正离子采集和5mmol/L乙酸铵-乙腈为流动相进行ESI-负离子采集。结果显示7类45种兽药在1～500μg/L范围内线性关系良好，相关系数均大于0.99，方法检测限均在0.25μg/L以下，除磺胺胍回收率为58.85％外，其余目标物回收率均在70.22％～120.69％，相对标准偏差RSD为1.18％～22.03％。该方法灵敏度高、准确性好，满足多兽药残留的筛查检测要求。应用此方法对对淡水（鲤鱼、南北白对虾、泥鳅）和海水（鲍鱼）养殖水体样品进行筛查检测，结果均为阴性样品。

目录

声明

摘要

0 前言

0．1 兽药残留现状与适当保护水平ALOP

0．1．1 我国活鱼养殖中兽药残留现状研究

0．1．2 欧美日各国其活鱼适当保护水平ALOP的研究

0．1．3 养殖水体中兽药残留与活鱼适当保护水平ALOP的关系

0．2 养殖水体中兽药多残留的研究现状

0．3 液相色谱-四级杆-飞行时间质谱技术(LC-Q-TOF)在多种兽残检测中的应用

0．3．1 飞行时间质谱技术(LC-Q-TOF)简介

0．3．2 LC-Q-TOF技术在兽药检测领域的应用

0．4 研究目的、意义及主要内容

1 7类45种兽药标准品的LC-Q-TOF检测方法探究

1．1 实验材料与方法

1．1．1 实验仪器

1．1．2 实验材料

1．1．3 标准溶液配制

1．1．4 液相色谱条件的建立

1．1．5 飞行时间质谱条件的建立

1．2 结果与讨论

1．2．1 液相色谱柱的选择

1．2．2 流动相的选择

1．2．3 梯度洗脱条件的建立

1．2．4 质谱采集参数的优化

1．2．5 提取窗口的优化

1．2．6 7类45种兽药标准品的线性范围、仪器检测限(LOD)和定量限(LOQ)

1．3 本章小结

2 7类45种兽药TOF筛查谱库的建立及应用

2．1 实验材料与方法

2．1．1 实验材料

2．1．2 质谱数据库的建立

2．1．3 筛查方法

2．2 结果与讨论

2．2．1 7类45种兽药一级全扫描筛查参数的优化

2．2．2 7类45种兽药二级全扫描筛查参数的优化

2．2．3 筛查参数有效性验证

2．3 本章小结

3 养殖水体中7类45种兽药残留的检测方法研究

3．1 实验材料与方法

3．1．1 实验仪器

3．1．2 实验材料

3．1．3 实验样品

3．1．4 标准溶液的配制

3．1．5 样品前处理

3．1．6 液相色谱条件

3．1．7 飞行时间质谱条件

3．2 结果与讨论

3．2．1 SPE固相萃取柱的选择

3．2．2 洗脱液的选择

3．2．3 洗脱体积的优化

3．2．4 基质效应的影响

3．2．5 方法检出限和定量限

3．2．6 基底加标回收率和标准偏差

3．2．7 实际养殖水样品检测结果

3．3 本章小结

4 结论和展望

附录

参考文献

致谢

个人简历

攻读硕士期间的研究成果