鞘内注射抗促肾上腺皮质激素释放激素血清对针刺夹脊穴镇痛的影响及机制研究

摘要

目的:观察电针(EA)夹脊穴对弗氏完全佐剂诱发的炎症痛模型(AA)大鼠的镇痛治疗作用和神经内分泌免疫调节作用,并观察鞘内注射抗促肾上腺皮质激素释放激素血清(anti-corticotropin-releasinghormoneserum,ACRHS,即抗CRH血清)对其影响,以探讨内源性的促肾上腺皮质激素释放激素(corticotropin-releasinghormone,CRH)在针刺镇痛和神经内分泌免疫调节作用的可能共同机制;观察鞘内注射抗CRH血清对于AA大鼠下丘脑Gi蛋白(inhibitoryGTP-bindingprotein,Gi)表达的变化及对EA镇痛的影响,以初步探讨内源性CRH镇痛的细胞信号转导机制;观察鞘内注射抗CRH血清及抗5-HT血清对AA大鼠痛阈及电针镇痛的影响,进一步探讨内源性CRH与5-HT的相互关系。
　　方法:以AA大鼠为研究对象,应用行为学痛阈观察、足跖容积测定、高效液相电化学法、放射免疫法等方法,观察EA夹脊穴和鞘内注射抗CRH血清对AA大鼠痛阈、足跖容积、下丘脑5-羟色胺(5-HT)含量、下丘脑及脊髓β-内啡肽(β-EP)含量、血清IL-6、α-肿瘤坏死因子水平的影响;应用免疫组织化学技术观察鞘内注射抗CRH血清及电针对于CRH免疫阳性神经元在AA大鼠下丘脑表达的影响;以免疫印迹法观察鞘内注射抗CRH血清及电针对AA大鼠下丘脑Gi蛋白表达的影响。观察鞘内注射抗CRH血清及抗5-HT血清对AA大鼠痛阈及电针镇痛的影响。
　　结果:EA夹脊穴可提高AA大鼠痛阈,降低足跖容积和足跖肿胀率,提高下丘脑及脊髓β-EP含量,降低IL-6水平;鞘内注射抗CRH血清可降低AA大鼠痛阈及EA镇痛效果,降低下丘脑5-HT、β-EP和脊髓β-EP含量,升高血清IL-6和α-肿瘤坏死因子水平;鞘内注射抗CRH血清后,CRH表达降低,而电针增强其表达;电针或鞘内注射抗CRH血清可调节大鼠下丘脑Gi蛋白表达。内源性CRH与内源性5-HT之间在镇痛作用中有密切关系。
　　结论:内源性的CRH可能是针刺镇痛和神经内分泌免疫调节中的一个重要调节点,其作用可能与Gi蛋白介导的细胞信号转导机制有关。

目录

提要

Abstract

引言

第一部分 电针腰夹脊穴对AA 大鼠的镇痛、抗炎作用及对中枢β-EP 和血清IL-6 的影响

实验一 电针腰夹脊穴对佐剂性关节炎大鼠的镇痛及治疗作用

1 材料与方法

2 结果与分析

实验二 电针腰夹脊穴对AA 大鼠的中枢β-EP 和血清IL-6 的影响

1 材料与方法

2 结果与分析

第二部分 鞘内注射ACRHS 对针刺镇痛和中枢5-HT、β-EP 及血清IL-6、TNF-α的影响

实验一 鞘内注射ACRHS 对AA 大鼠痛阈及电针镇痛的影响

1 材料与方法

2 结果与分析

实验二 鞘内注射ACRHS 对AA 大鼠中枢5-HT、β-EP 及血清IL-6、TNF-α的影响

1 材料与方法

2 结果与分析

第三部分 鞘内注射ACRHS 对CRH 在AA 大鼠下丘脑表达的影响

1 材料

1.1 动物

1.2 主要试剂和溶液的配制

1.3 主要仪器

2 方法

2.1 动物分组与处理

2.2 鞘内埋管与鞘内注射

2.3 模型建立与电针

2.4 大鼠脑石蜡切片制备

2.5 免疫组织化学技术检测

2.6 观测指标

2.7 统计学处理

3 结果与分析

第四部分 电针及鞘内注射ACRHS 对AA 大鼠下丘脑Gi 蛋白含量的影响

1 材料与方法

1.1 材料

1.2 方法

2 结果与分析

第五部分 鞘内注射抗5-HT 血清对内源性CRH 镇痛及电针镇痛的影响

1 材料与方法

1.1 材料

1.2 方法

2 结果与分析

2.1 鞘内注射抗5-HT 血清对ACRHS 对AA 大鼠痛阈的影响

2.2 鞘内注射抗5-HT 血清对ACRHS 对AA 大鼠电针镇痛的影响

讨论

1 动物模型的选择

2 电针参数的选择依据

3 夹脊穴镇痛的中医理论基础

4 夹脊穴镇痛的神经解剖基础与生理机制

5 电针夹脊穴对AA 大鼠镇痛和神经内分泌免疫系统的调节作用

6 内源性CRH 在镇痛、电针镇痛和神经内分泌免疫调节中的作用

6.1 内源性CRH 在镇痛及电针镇痛中的作用

6.2 内源性CRH 在神经内分泌免疫调节中的作用

7 内源性CRH 在针刺镇痛中与内源性中枢5-HT 的关系

8 电针及鞘内注射ACRHS 对AA 大鼠下丘脑Gi 蛋白含量的影响

结语

问题与展望

参考文献

综述

参考文献

附录

致谢