ACE2内源性激动剂对糖尿病心肌病的保护作用及可能机制探讨

摘要

目的: 1、探讨乙酰甘氨酸重氮氨苯脒(Diminazene aceturate，DIZE)做为新型的血管紧张素转换酶2（Angiotensin-converting enzyme2，ACE2）激动剂，是否可以内源性的激动ACE2。 2、观察DIZE对糖尿病心肌病大鼠心肌的保护作用，并探讨其可能机制。 方法: 1、动物模型建立：健康的雄性Wistar大鼠46只,体重约180-200g。将大鼠随机分成正常对照组12只和造模组34只。适应性喂养7天，予以造模组大鼠禁食12h处理后腹腔一次性注射链脲佐菌素65mg/kg，正常组大鼠腹腔注射相等剂量的柠檬酸盐缓冲液做对照处理。注射三天后检测造模组各只大鼠血糖，血糖大于16.7mmol/L者则造模成功。并将造模成功的大鼠随机分成DCM组和DIZE治疗组。喂养12周后分别给予治疗组DIZE15mg/kg/d，DCM对照组予以等量生理盐水处理4周。16周末麻醉后行超声检测并摘取心肌组织。 2、大鼠血糖及体重测定：分别在造模之前，造模成功后及取材之前对各组大鼠进行体重和血糖的测定。 3、心功能检测：16周末予以各组大鼠腹腔注射10%水合氯醛3ml/kg进行麻醉，麻醉后使用超声检测各组大鼠的心功能。 4、ELISA法检测大鼠心肌中AngⅡ和Ang(1-7)的含量：应用ELISA试剂盒测定各组大鼠心肌组织中AngⅡ和Ang(1-7)含量。 5、Masson染色法观察心肌纤维化情况 6、免疫组织化学染色：将组织进行石蜡包埋并切片，进行collegenⅠ，collegenⅢ，CTGF,IL-1和IL-6免疫组织化学染色。 7、Real-time PCR:进行collegenⅠ，collegenⅢ，CTGF基因的荧光定量检测。 8、免疫印迹法（Western blot）：取大鼠心肌组织提取总蛋白，电泳检测心肌中ACE2蛋白的表达，ERK1/2通路的激活情况。 结果: DIZE治疗后糖尿病大鼠心肌中的ACE2蛋白表达显著增加，AngⅡ含量降低，Ang(1-7)含量升高。DIZE治疗组与糖尿病模型组比较胶原含量及L-1，IL-6显著下降。与正常组比较，糖尿病心肌病组E/A、EF、FS明显下降，DIZE治疗组较DCM组E/A、EF、FS明显改善。DCM组与N组比较，ERK的磷酸化明显增加，治疗组则减轻了这一变化。 结论: ACE2内源性激动剂乙酰甘氨酸重氮氨苯脒显著提高了ACE2的活性，并可能通过调节ACE2-Ang(1-7)-Mas轴，激活ERK1/2通路进而改善糖尿病大鼠心功能，抑制心肌纤维化，炎症及凋亡的发展。从而对糖尿病心肌病大鼠心功能起到保护性作用。

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