骨髓自噬相关蛋白P62、Beclin1、LC3B与再生障碍性贫血中医证型的相关性研究

摘要

目的：测定再生障碍性贫血（aplastic anemia，AA，再障）患者骨髓单个核细胞端粒长度（TEL）及自噬相关蛋白P62、Beclin1、LC3B表达水平，并研究再障中医证型与骨髓单个核细胞端粒长度、P62、Beclin1、LC3B表达水平的相关性，以进一步探求自噬与AA发病的关系。并分析外周血淋巴细胞免疫分型与端粒长度、P62、Beclin1、LC3B表达的相关性，从而探究自噬与AA免疫异常的相关性。 方法：本研究收集AA患者79例，中医辨证分型分为：急痨髓枯证21例，肾阳虚证19例，肾阴虚证19例，肾阴阳两虚证20例。并收集24例正常人骨髓单个核细胞做对照组。运用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-q PCR)检测患者与正常组骨髓单个核细胞端粒长度、P62、Beclin1、LC3B mRNA表达水平。探讨AA患者中医证型与骨髓单个核细胞端粒长度、P62、Beclin1、LC3B mRNA表达水平的相关性。并研究AA患者骨髓单个核细胞端粒长度、P62、Beclin1、LC3B之间的相关性。研究CAA、SAA患者端粒长度（TEL）与P62、Beclin1、LC3B mRNA表达水平与外周血CD8+、CD4+、T淋巴细胞百分比的相关性。 结果：1.CAA患者与SAA患者端粒长度较正常对照组明显降低；CAA患者与SAA患者P62mRNA表达水平较正常对照组明显升高；CAA患者与SAA患者Beclin1mRNA表达较正常对照组明显降低；CAA患者与SAA患者LC3B mRNA表达较正常对照组明显降低,且SAA患者较CAA患者LC3B mRNA的表达降低，以上结果均具有统计学意义。2.端粒长度在肾阴虚证、肾阴阳两虚证、急痨髓枯证患者端粒长度表达水平较肾阳虚证组降低，各组表达水平均低于正常对照组的表达水平，有统计学意义；肾阴虚证、肾阴阳两虚证、急劳髓枯证患者P62mRNA的表达水平较肾阳虚证组升高，肾阴阳两虚证患者P62mRNA的表达水平较肾阴虚证组升高，各组表达水平均高于正常对照组的表达水平，有统计学意义；肾阴虚证、肾阴阳两虚证、急痨髓枯证患者Beclin1、LC3B mRNA的表达水平较肾阳虚证组降低，各组表达水平均低于正常对照组的表达水平，有统计学意义。3.端粒长度与P62mRNA表达水平呈负相关（R=-0.384，P＜0.05），端粒长度与LC3B mRNA表达水平呈正相关性（R=0.315，P＜0.05）。P62与Beclin1、LC3B mRNA表达水平均呈负相关性（R=-0.365R=-0.913,P＜0.05）。4.CAA组较SAA组患者外周血T淋巴细胞百分比低，CAA组较SAA组患者外周血CD8+%低，CAA组较SAA组患者外周血CD4+百分比与CD4+/CD8+比值差异没有统计学意义。端粒长度（TEL）表达与T淋巴细胞百分比、CD8+百分比、CD4+百分比呈负相关性；P62mRNA表达水平与T淋巴细胞百分比、CD8+百分比、CD4+百分比之间呈正相关性；Beclin1、LC3B mRNA表达水平与T淋巴细胞百分比、CD8+百分比之间呈负相关性。 结论：1.自噬相关蛋白P62、Beclin1、LC3B及端粒均可参与AA的发病，且P62高表达、LC3B低表达可能与端粒长度具有相关性。2.端粒长度缩短在AA发病和疾病进展中起重要作用，急劳髓枯组表达最低，急劳髓枯患者端粒损耗更多。3.P62在AA患者骨髓中表达增高，且在急痨髓枯组中表达最高，提示细胞内废物积累，自噬水平减低。Beclin1、LC3B在AA患者骨髓中低表达，急劳髓枯组中最低，提示自噬减低。4.端粒长度与P62mRNA表达水平呈负相关，端粒长度与LC3B mRNA表达水平呈正相关性。P62与Beclin1、LC3B mRNA表达水平均呈负相关性。5.AA患者端粒长度（TEL）与P62、Beclin1、LC3B mRNA表达水平与外周血CD8+、CD4+、T淋巴细胞有相关性。

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