内质网应激分子伴侣GRP78在大鼠肝脏I/R损伤中的表达及意义

摘要

目的：
　　通过检测内质网应激相关分子葡萄糖调节蛋白-78(glucose regulated protein-78，GRP78)在缺血再灌注（ischemia reperfusion，I/R）后SD大鼠肝脏组织中的表达水平，研究GRP78和肝缺血再灌注损伤的关系及内质网应激在肝缺I/R损伤中的机制。
　　方法：
　　采用大鼠肝脏70％缺血模型，夹闭肝脏左中叶脉管系统，形成肝脏左叶和中叶缺血。将30只SD大鼠随机分为3组：假手术组(SO)、缺血组(I)和再灌注组(I/R)， SO组经开腹解剖肝门部，根据暴露6h和12h，随机分为SO6h和SO12h组,各6只；I组6只，缺血30min；I/R组缺血30min后，根据再灌注6h和12h，随机分为I/R6h和I/R12h组，每组各6只。采用全自动生化分析仪检测血清ALT和AST；同时采用RT-PCR(Real-time-PCR)检测肝脏组织中GRP78mRNA表达水平；HE染色观察各组大鼠肝脏组织病理学改变；TUNEL染色观察肝细胞凋亡情况。所有数据采用SPSS17.0软件进行统计学分析。
　　结果：
　　1.与SO组比较，30minI、I/R6h和I/R12h组血清ALT均升高，分别为51.01±5.29u/L，131.91±1.74u/L和289.55±4.03u/L；血清AST亦升高，分别为97.94±4.42u/L，324.04±3.22u/L和685.38±5.13u/L，两指标差异均具有统计学意义，组间比较，I/R12h组显著高于I/R6h组（P<0.05）。
　　2.与SO组比较，30minI、I/R6h和I/R12h组GRP78mRNA表达均上调，分别为0.76±1.04，2.61±1.48和5.57±2.11，以缺血再灌注组上调明显（P<0.01），且再灌注12h的GRP78mRNA表达较6h升高更明显（P<0.01）。
　　3. HE染色结果示与SO组比较，30minI组肝脏组织肉眼可见变得苍白，颜色暗淡，显微镜下可见肝索排列异常，肝血窦增宽。I/R组肝脏组织可见不同程度的淤血点，镜下肝脏损伤较30minI组程度重，可见肝血窦宽度增加，肝索排列异常，肝细胞点状缺血性坏死，I/R12h较6h组明显，且正常肝细胞数目明显减少。
　　4.与SO组相比，30minI和30minI/R组均可见肝细胞凋亡，以后者为著。再灌注12h较6h肝细胞凋亡更明显。I、I/R6和I/R12组细胞凋亡指数（AI）分别为（3.22±0.03）%，(20.87±0.71)%和(59.11±1.92)%。30minI/R组AI明显高于I组（P<0.01），且I/R12h高于6h组（P<0.05）。
　　结论：
　　1.内质网分子伴侣GRP78mRNA在肝脏缺血再灌注损伤中表达是上调的。
　　2.内质网应激可能通过GRP78参与了肝急性缺血再灌注损伤机制。

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第1章 前 言

第2章 材料和方法

2.1 研究对象

2.2 主要实验器材及耗材

2.3 主要试剂及引物

2.4实验方法

2.4.1 实验动物分组

2.4.2 动物模型的制作和样本的采集

2.4.3肝功能的测定

2.4.4 肝脏组织GRP78mRNA水平的测定

2.4.5 HE染色

2.4.6 TUNEL（TdT-mediated dUTP nick end labeling）法检测凋亡

2.5统计学处理

第3章 结 果

3.1 各组实验动物模型建立情况

3.2 各组大鼠ALT和AST 水平的变化

3.3各组肝组织GRP78mRNA的表达

3.4 各组大鼠肝脏组织病理学改变

3.5 细胞凋亡情况

第4章 讨 论

实验小结

第5章 结 论

参考文献

致谢

附录

综述: 内质网应激在肝脏缺血再灌注损伤中的研究进展

攻读学位期间取得的研究成果

作者简介