鲤鱼脾脏组织细胞膜IgM结合蛋白（IGBP）的分离纯化及部分性质研究

摘要

本研究以我国常见的鲤鱼(Cyprinus carpio L．)为材料，对鲤鱼脾脏组织细胞膜表面存在的免疫球蛋白结合蛋白(IGBP)进行了分离，并对其在鲤鱼其它组织中的分布进了研究。 1.采用Hitrap protein A HP亲和层析法从鲤鱼血清中纯化得到IgM，SDS-PAGE分析表明，血清IgM可以解离形成重链和轻链，分子量分别为82kDa和29kDa。 2.以鲤IgM制备亲和层析柱，制备收集鲤鱼脾脏细胞膜蛋白并经IgM制备的亲和层析柱，分离纯化获得鲤鱼IgM结合蛋白(IGBP)，SDS-PAGE分析表明，在38 kDa到45 kDa范围内共有三种IgM结合蛋白。用IgM结合蛋白作为抗原免疫豚鼠制备豚鼠抗IGBP的抗血清。 3.利用不同的荧光标记物对鲤鱼脾脏、肠、皮肤及肝组织细胞进行免疫荧光标记，并进行激光共聚焦观察分析。首先，利用FITC标记鲤鱼血清IgM(简称FITC-IgM)，进行免疫组织化学研究发现，鲤鱼脾脏、肠、皮肤及肝组织细胞呈现IgM结合阳性。进一步利用亲和层析分离得到的IGBP免疫豚鼠制备抗IGBP抗血清(Anti-IGBP)作为一抗，以FITC标记的羊抗豚鼠抗体为二抗进行间接免疫荧光染色。观察显示，鲤鱼脾脏、肠、皮肤及肝组织细胞呈现IGBP阳性，而以正常豚鼠血清作为一抗的对照组则显示IGBP阴性。以上研究结果表明，IgM结合蛋白(IGBP)不仅存在于脾脏组织细胞中，同时鲤鱼肠、皮肤及肝组织的细胞也有IgM结合蛋白(IGBP)的存在。 本研究通过亲和层析方法获得鲤鱼脾脏细胞膜IgM结合蛋白(IGBP)，在鱼类粘液性免疫球蛋白转运及免疫反应中都需要IgM结合蛋白(IGBP)的参与，因而IgM结合蛋白(IGBP)在鱼类特异性体液免疫中可能起到关键作用，对其进行深入研究对全面了解鱼类以IgM为中心的特异性免疫具有重要意义。

目录

声明

综述 鱼类免疫因子研究进展

1鱼类免疫概述

2非特异性免疫因子

2.1抗菌肽

2.2补本

2.3干扰素

2.4凝集素

2.5溶菌酶

2.6 C反应蛋白

3特异性免疫因子

3.1免疫球蛋白

3.2多聚免疫球蛋白受体

3.3 Fc受本

前言

第一部分鲤鱼IgM的分离纯化

1实验材料

1.1实验动物

1.2主要实验仪器

1.3主要试剂

2实验方法

2.1 Hitrap protein A HP亲和层析柱纯化鲤鱼免疫球蛋白

2.3纯度分析

3实验结果

3.1 Hitrap protein A HP亲和层析柱纯化鲤鱼血清免疫球蛋白

3.2 Hitrap protein A HP亲和层析柱的SDS-PAGE纯度鉴定结果

4讨论

第二部分IgM结合蛋白的分离纯化

1实验材料

1.1实验动物

1.2主要实验仪器

1.3细胞膜蛋白分离常用试剂

1.4 SDS-PAGE常用试剂

1.5银染常用试剂

1.6亲和层析常用试剂

2方法

2.1鲤鱼脾脏细胞膜蛋白的提取及检测

2.2鲤鱼脾脏细胞膜IgM结合蛋白的亲和纯化和检测

3实验结果

3.1鲤鱼脾脏细胞膜蛋白的提取检测

3.2鲤鱼脾脏细胞膜IgM结合蛋白的纯化及检测

4讨论

第三部分IgM结合蛋白的分布研究

1实验材料

1.1实验动物

1.2实验试剂

2实验方法

2.1豚鼠抗鲤鱼脾脏细胞膜IgM结合蛋白抗血清的制备

2.2荧光素标记鲤鱼血清IgM的制备

2.3免疫荧光标记

3实验结果

4讨论

结论

参考文献

致谢