青海地区乳腺癌发病特点及HIF-2α、CA9、CA12在乳腺癌发病机制中的探索研究

摘要

目的：乳腺癌是全世界女性最常见的恶性肿瘤，在我国发病率已居女性恶性肿瘤的首位，且呈上升趋势。低氧在恶性肿瘤的发生发展过程中起到极为关键的作用，其中涉及低氧诱导因子（Hypoxia inducible factor，HIF）家族和碳酸酐酶(Carbonic anhydrase，CA)家族的调控。低氧诱导因子家族在低氧条件下可触发多种导致肿瘤进展的基因的表达，直接或间接地促进肿瘤进展的过程。碳酸酐酶是肿瘤微环境pH调节的关键因子。本课题拟从流行病学、临床病理特征、分子机制角度研究青海高原地区女性乳腺癌的发病特点、临床病理特征，并进一步探索分析HIF-2α、CA9、CA12在乳腺癌侵袭、转移过程中的作用。
　　方法：
　　1.统计青海大学附属医院2001-2010年10年的全部恶性肿瘤病例资料，回顾性分析青海地区恶性肿瘤的流行病学特点，特别是乳腺癌的发病资料。
　　2.统计青海大学附属医院2001-2012年收治的汉族、藏族、回族共259例乳腺癌病例，回顾性分析比较三个民族乳腺癌的临床及病理学特点。
　　3.收集94例乳腺癌患者总结其临床资料。使用免疫组化方法检测HIF-2α、CA9、CA12的表达，并将其与临床病理特点建立相关性。使用慢病毒载体构建SiRNA干扰质粒以沉默 HIF-2α，培养并转染 MCF-7细胞，使用 JNK抑制剂SP600125处理后在常氧及低氧条件下检测 MCF-7细胞及 HIF-2α沉默细胞HIF-2α、CA9、CA12的表达。
　　结果：
　　1.男性主要的恶性肿瘤是胃癌、肺癌、肝癌、结直肠癌、食管癌，女性最常见的恶性肿瘤是胃癌、肺癌、乳腺癌、宫颈癌、结直肠癌。恶性肿瘤在不同海拔地区每10万人口年新发病例约为47.39、31.21、10.91（P<0.001），有统计学意义。乳腺癌就诊数较少，在少数民族中呈散发。
　　2.回族、藏族乳腺癌患者35岁前发病比例较汉族高；藏族、汉族在36-50岁年龄段较常见，比回族比例高。汉族乳腺癌患者中生育次数少者较其它民族高。
　　3. HIF-2α在乳腺癌T2及Ⅱ期中高表达（P<0.05），CA12在Ⅱ期中高表达（P<0.05），CA9、CA12的表达一致(R=0.376，P=0.0001)，HIF-2α表达与CA9（P=0.21）、CA12（P=0.27）无相关性。HIF-2α在乳腺癌MCF-7细胞低氧条件下表达增强。在HIF-2α沉默细胞中CA9、CA12也有表达。JNK信号通路抑制剂 SP600125可抑制 HIF-2α表达，并抑制乳腺癌细胞的侵袭、粘附能力，但对CA9、CA12影响较小。
　　结论：
　　1.青海地区肿瘤发病呈递增趋势，发病情况与全国情况不一致；青海各民族恶性肿瘤的发生部位不同，均以消化道肿瘤常见，发病情况各异；随海拔的升高，除撒拉族外，各民族恶性肿瘤发病下降；乳腺癌呈散发特点，有增高趋势。
　　2.青海地区乳腺癌的发病特点、病理特征及分子分型在各民族间无明显差异；生育次数少对汉族乳腺癌的发生有一定影响。
　　3. HIF-2α、CA9、CA12是乳腺癌中重要的低氧调节因子，在低氧微环境中对乳腺癌的进展发挥作用，JNK信号通路参与乳腺癌的侵袭及转移。CA9、CA12的上游调控并非HIF-2α起主导作用，推测其受HIF-1α等其它低氧相关基因调控。

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主要符号对照表

第一部分 流行病学资料青海大学附属医院2001-2010年恶性肿瘤住院病例构成特点回顾性分析

第1章 前言

第2章 材料和方法

第3章 结果

第4章 讨论

第5章 结论

参考文献

第二部分 乳腺癌临床资料分析青海地区汉族、藏族、回族乳腺癌临床特点及分子分型回顾性分析

第1章 前言

第2章 材料与方法

第3章 结果

第4章 讨论

第5章 结论

参考文献

第三部分 乳腺癌微环境低氧分子机制探索性研究HIF-2α、CA9、CA12在人乳腺癌中的表达及其与侵袭转移关系的研究

第1章 前言

第2章 HIF-2α、CA9、CA12在乳腺癌组织中的表达

第3章 靶向HIF-2α的RNA干扰慢病毒载体的构建

第4章 乳腺癌MCF-7细胞HIF-2α、CA9、CA12蛋白的表达

第5章 c-Jun N-terminal kinases（JNK）信号通路与HIF-2α在乳腺癌发病机制中的探索研究

第6章 讨论

第7章 结论

参考文献

综述

碳酸酐酶9和碳酸酐酶12在肿瘤形成、发展和治疗中的作用

参考文献

致谢

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