M3受体在低氧引起的H9c2大鼠心肌细胞损伤中的作用及机制的研究

摘要

目的探讨卡巴胆碱(carbachol, CCH)激活M3受体在CoCl2诱导的大鼠心肌细胞系H9c2低氧损伤中的作用及机制。 方法 正常大鼠心肌细胞系H9c2作对照组，利用CoCl2建立低氧损伤模型，选用M3受体特异性激动剂CCH及其特异性阻断剂4-二苯乙酰氧基-N-甲基-哌啶甲碘化物(4-diphenyl-acetoxy-N-methyl-piperidine methiodide,4-DAMP)对低氧损伤组进行干预。3-（4，5-二甲基噻唑-2）-2，5-二苯基四氮唑溴盐[3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide, MTT]比色法检验细胞增殖活力；流式细胞计量术检测细胞凋亡；2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐(2',7'-Dichlorodihydrofluorescein diacetate, DCFH-DA)染色荧光显微镜照相法检测胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平；Hoechst33258核染色荧光显微镜照相法测定凋亡细胞的形态及数量的变化；Western blot检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)和血红素加氧酶1(heme oxygenase-1,HO-1)的蛋白表达水平。 结果 低氧模型组细胞凋亡率显著增高(P<0.01) ，细胞增殖显著降低(P<0.01)；ROS生成显著增多(P<0.01)；HIF-1α、caspase-3和HO-1蛋白表达水平显著上调(P<0.01)。用CCH干预后细胞凋亡率明显下降(P<0.01)，细胞增殖活力明显增加(P<0.01)；ROS水平显著下降(P<0.01)；HIF-1α和HO-1蛋白表达水平显著上升(P<0.01)；caspase-3蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。应用 4-DAMP干预后，由CCH介导的上述相关作用被抑制。 结论 CCH激活M3受体抑制CoCl2诱导的大鼠心肌细胞系H9c2的低氧损伤，机制可能与HIF-1α和HO-1的蛋白表达水平上调有关。

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