松花粉甾醇对3T3-F442A前脂肪细胞增殖、分化及糖代谢的影响

摘要

马尾松花粉——我国传统品种花粉,被广泛应用于药品、保健品等领域,具有抗氧化、调节血脂等功能;植物甾醇具有降低机体胆固醇含量的功效,在功能性食品中应用十分广泛,具有很高的应用价值。本论文的主要研究内容如下:
　　研究目的:培养3T3-F442A前脂肪细胞,并对其进行诱导分化,研究马尾松花粉甾醇对3T3-F442A前脂肪细胞增殖、分化及糖代谢的影响,胆固醇、β-谷甾醇分别作为动物来源固醇和植物来源甾醇对照组。通过检测成熟脂肪细胞内AMPK、GLUT1表达含量,试图探究马尾松花粉甾醇影响成熟脂肪细胞糖代谢的内在机制。
　　研究方法:培养3T3-F442A前脂肪细胞,分别在24h、48h和96h后采用MTT检测法检测马尾松花粉甾醇及对照组(胆固醇和β-谷甾醇)对3T3-F442A前脂肪细胞增殖的影响;利用胰岛素对3T3-F442A前脂肪细胞进行诱导,分别采用油红 O染色、甘油三酯含量测定两种方法来分析马尾松花粉甾醇及对照组(胆固醇和β-谷甾醇)对3T3-F442A前脂肪细胞分化的影响;将3T3-F442A前脂肪细胞诱导成功待用,采用MTT检测法检测马尾松花粉甾醇及对照组(胆固醇和β-谷甾醇)对3T3-F442A脂肪细胞增殖活性的影响;将3T3-F442A前脂肪细胞诱导成功待用,采用葡萄糖氧化酶法检测马尾松花粉甾醇及对照组(胆固醇和β-谷甾醇)对3T3-F442A成熟脂肪细胞葡萄糖消耗量的影响;用酶联免疫检测试剂盒检测成熟脂肪细胞AMPK、GLUT1表达含量。
　　研究结果:
　　(1)培养细胞24h后,松花粉甾醇极显著抑制3T3-F442A前脂肪细胞增殖(P<0.01),随时间推移抑制效果直线减弱,培养96h后细胞充满板孔,不再呈现抑制效果。
　　2、油红O染色结果显示细胞内出现融环状脂滴,分化的细胞形态变成椭圆形或圆形,随着分化不断进行,细胞内脂滴积累逐渐增加,细胞体积不断增大。马尾松花粉甾醇组与空白对照组相比,起促进分化的作用,且随浓度增加,分化率逐渐提高;胆固醇对照组与空白组相比,起促进分化的作用,且随浓度增加,分化率逐渐提高,分化率较马尾松花粉甾醇组高;β-谷甾醇组亦呈现出促进分化的效果,其中以6.4μg/mL组分化率最高。甘油三酯含量测定结果显示,三种物质都不同程度的增加了3T3-F442A脂肪细胞甘油三酯的含量,其中3.2μg/mL、6.4μg/mL和12.8μg/mL的马尾松花粉甾醇对3T3-F442A脂肪细胞甘油三酯含量有极显著增强作用(P<0.01),呈剂量依赖。
　　3、用含有马尾松花粉甾醇及对照组(胆固醇和β-谷甾醇)的培养基处理成熟3T3-F442A脂肪细胞,MTT法检测各组对成熟脂肪细胞增殖的影响,结果显示处理96h时,6.4μg/mL马尾松花粉甾醇极显著抑制成熟脂肪细胞增殖活性(P<0.01)。
　　4、用含有马尾松花粉甾醇及对照组(胆固醇和β-谷甾醇)的培养基处理成熟3T3-F442A脂肪细胞,除去24h时6.4μg/mL的胆固醇,其余时间各组均抑制脂肪细胞对葡萄糖的消耗。其中,24h时,0.8μg/mL马尾松花粉甾醇显著抑制脂肪细胞对葡萄糖的消耗(P<0.05)。
　　5、与空白组相比,3.2μg/mL、6.4μg/mL和12.8μg/mL的马尾松花粉甾醇极显著抑制3T3-F442A成熟脂肪细胞AMPK、GLUT1表达(P<0.01)。
　　结论:松花粉甾醇对3T3-F442A前脂肪细胞增殖有抑制作用;促进3T3-F442A前脂肪细胞分化;对3T3-F442A成熟脂肪细胞增殖活性、3T3-F442A脂肪细胞糖代谢、AMPK、GLUT1表达均为抑制作用。

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第一章 综述

1马尾松花粉

2甾醇的结构与性质

3 脂肪组织

4国内外研究现状及趋势

第二章 松花粉甾醇对3T3-F442A前脂肪细胞增殖的影响

1 材料与试剂

2 仪器与设备

3 试剂配制

4 方法步骤

5 实验结果

6 讨论

第三章 松花粉甾醇对3T3-F442A前脂肪细胞分化的影响

1 材料与试剂

2 仪器与设备

3 试剂配制

4 方法步骤

5 实验结果

6 讨论

第四章 松花粉甾醇对3T3-F442A脂肪细胞增殖活性的影响

1 材料与试剂

2 仪器与设备

3 试剂配制

4 方法步骤

5 实验结果

6 讨论

第五章 松花粉甾醇对3T3-F442A脂肪细胞糖代谢的影响

1 材料与试剂

2 仪器与设备

3 试剂配制

4 方法步骤

5 实验结果

6 讨论

第六章 松花粉甾醇对3T3-F442A脂肪细胞AMPK、GLUT1的影响

1 材料与试剂

2 仪器与设备

3 试剂配制

4 方法步骤

5 实验结果

6 讨论

结论

参考文献

致谢

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