雄激素受体基因、性激素结合球蛋白基因多态性、指长比与PCOS的关联性研究

摘要

背景和目的：多囊卵巢综合征(PCOS)是育龄期女性常见的一种高度异质性的内分泌代谢紊乱性疾病，临床表现多种多样，典型的表现为不同程度的月经异常、卵巢多囊性改变、高雄激素血症、不孕、多毛、痤疮、肥胖等，并常伴有随年龄增长而日益明显的胰岛素抵抗、高胰岛素血症和高脂血症，常合并2型糖尿病和心血管疾病。迄今为止，PCOS的病因尚不清楚，其明显的家族聚集性提示遗传因素在PCOS的发病中起重要作用，由于临床表现的异质性，多数研究认为:PCOS很可能是少数几个关键基因与微效基因共同作用，这种遗传易感性与环境因素相互作用而发病的，而且对于不同种族，不同家庭，起关键作用的基因可能不同。国外对PCOS的多种基因进行了研究，结果不尽相同，国内对PCOS的致病基因研究不多。国外学者还研究表明指长比有性别、种族和地域差异，与个体攻击性行为、艾滋病病毒易感性、心肌梗塞、乳腺癌、精子数量、及同性恋等有关，但国内研究较少。
　　本课题针对PCOS常见的高雄激素血症的内分泌特征，选择与雄激素有关的雄激素受体(AR)基因和性激素结合球蛋白（SHBG）基因进行研究，旨在探讨AR基因微卫星（CAG）n多态性和SHBG基因（TAAAA）n多态性与PCOS发病及临床特征的关系，寻找PCOS的致病基因，以期为PCOS的预防和治疗提供理论基础。同时研究指长比与PCOS的相关性，以期为国内女性PCOS患者的早期筛选、诊断和预防提供一定的理论依据。
　　方法:收集2008年10月-2010年4月在宁夏医科大学附属医院生殖医学中心就诊的PCOS患者191例作为PCOS组，并与PCOS患者同时期因单纯输卵管因素或男性因素不孕就诊的70名女性作为对照组。所有女性均排除其他内分泌疾患，近3月内未使用激素类药物，行血清性激素水平、空腹血糖、餐后2小时血糖、空腹胰岛素、餐后2小时胰岛素水平及血脂水平测定。并且记录月经、痤疮及脂肪肝的发生情况，测量体重、身高、腰围、臀围、血压、计算体重指数(BMI)、腰臀比、胰岛素抵抗(IR)、按照是否存在高雄激素血症将PCOS患者分为高雄激素组和雄激素水平正常组；按照是否存在胰岛素抵抗分为胰岛素抵抗组和非胰岛素抵抗组；按照BMI分为肥胖组和非肥胖组。对照组测定血清性激素水平及血脂水平。对各指标进行比较。从血液标本中提取DNA，PCR扩增所有标本的雄激素受体AR基因的CAG微卫星片段和性激素结合球蛋白SHBG基因的TAAAA片段，分别进行琼脂糖凝胶、毛细管电泳检测目的基因产物，对目的基因测序确定CAG和TAAAA重复次数。测量左右手第2-5指长度（掌侧），并计算各手指间的指长比值。
　　结果：1.PCOS患者的临床资料分析
　　1.1PCOS组于正常对照组比较，两组的年龄、初潮年龄、收缩压、舒张压、FSH、PRL、E2、CHOL、LDL、HDL之间没有差异,月经周期、腰围、臀围、WHR、BMI、痤疮发生率、LH、T、TG之间有差异，PCOS组均大于正常对照组。
　　1.2PCOS患者高雄激素组和雄激素正常组比较，两组的年龄、空腹胰岛素、空腹血糖、餐后2小时血糖、LH、FSH、PRL、E2均无差异,餐后2小时胰岛素、T、BMI有差异，PCOS组均大于正常对照组。
　　1.3PCOS患者胰岛素抵抗组与胰岛素非抵抗组比较，两组的年龄、E2、FSH、LH、PRL水平之间没有差异，而胰岛素抵抗组的PCOS患者的T、BMI、WHR和两个时点的血糖及胰岛素水平均高于胰岛素非抵抗组的PCOS患者，且差异有显著性。在高雄激素组中存在胰岛素抵抗的患者例数与雄激素正常组中存在的胰岛素抵抗的患者的例数有差异，高雄激素组例数高于雄激素正常组例数。
　　1.4PCOS患者肥胖组与非肥胖组比较，两组患者的年龄、空腹血糖、餐后2小时血糖、E2、FSH、LH、PRL水平之间没有差异，而空腹胰岛素、餐后2小时胰岛素、IR、T、BMI、WHR之间有差异，肥胖组均大于非肥胖组。
　　2.AR基因(CAG)n重复次数与多囊卵巢综合征的相关性研究
　　2.1AR基因（CAG）n重复次数的整体分布:AR-CAG重复次数在PCOS组为11-33，主要分布在22、23、21；在对照组为13-30，主要分布在22、21、23，两组均以22居多，两组均以22为界，按AR基因所含CAG重复次数，将其分为短组CAG(n≤22)与长组CAG(n＞22)，两组基因重复次数相似，无统计学意义。
　　2.2短组与长组AR基因CAG重复在PCOS患者高雄激素组与雄激素水平正常组的分布中短组患者例数高于长组，差异有统计学意义。短组与长组AR基因CAG在PCOS患者胰岛素抵抗组和非胰岛素抵抗组的分布无差异。
　　3.SHBG基因（TAAAA）n重复次数与多囊卵巢综合征的相关性研究
　　3.1SHBG基因（TAAAA）n重复次数的整体分布:共有6、7、8、9次重复4个等位基因,未检测到10次及11次重复。检测到6/6、6/7、6/8、6/9、6/11、7/7、7/8、7/9、7/10、8/8、8/9、8/10、9/9、9/10共14种基因型,未见6/10、10/10、7/11、8/11、9/11、10/11、11/11基因型。整个群体中,等位基因频率9＞6＞7＞8,各等位基因分布没有明显差异。
　　3.2PCOS患者与对照组SHBG基因等位基因频率、总基因型分布构成,差异均无统计学意义。PCOS患者胰岛素抵抗组与胰岛素非抵抗基因型分布的比较布总构成比差异无意义，9／9基因型在胰岛素抵抗组中高于胰岛素非抵抗组，两组有差异。
　　4.指长比与多囊卵巢综合症相关性研究
　　4.1对照组与PCOS患者组左手指长比均无差异，而右手PCOS组指长比均大于对照组，差异有统计学意义，以2D：4D、2D：5D差异更为显著。
　　4.2PCOS患者AR基因第一外显子(CAG)n短组与长组左右手指长比2D：5D、3D：5D差异有统计学意义，短组小于长组，其余左手指指长比均未显示出差异。右手AR基因第一外显子(CAG)n短组与长组比较差异无统计学意义。
　　结论：(1)宁夏汉族PCOS患者具有高雄激素血症、肥胖、胰岛素抵抗的内分泌代谢特征，且高雄激素血症和高胰岛素血症可以相互影响；(2)多囊卵巢综合征患者存在脂质代谢紊乱，其血脂异常主要表现为TG水平升高；(3)宁夏汉族妇女PCOS患者AR-CAG重复次数与睾酮水平呈正相关，即CAG重复次数越短，AR活性越高，睾酮水平越低；同时较短的CAG重复次数和较高的雄激素水平可影响PCOS患者的高雄表现，两者具有叠加作用；(4)AR-CAG多态性与高胰岛素血症之间无直接相关性，可能是通过高雄激素血症间接影响了高胰岛素血症的发生；(5)宁夏汉族妇女SHBG基因启动子(TAAAA)n重复多态等位基因、基因型及其数目与国外报道不同。9/9基因型(TAAAA)n重复多态可能与PCOS及胰岛素抵抗有关；(6)SHBG基因启动子(TAAAA)n多态性并不是一个造成宁夏汉族PCOS患者发生糖代谢异常的重要的、敏感的遗传因素和指标。（7）宁夏汉族女性指长比，尤其是右手高的2D：4D和2D：5D可能是PCOS早期发病风险的重要参考指标之一。而右手高的2D:3D可能是PCOS患者高胰岛素抵抗的有价值的信息。（8）左手2D：5D、3D：5D与AR基因多态性有关，重复次数少的AR基因表现出了低的2D：5D与3D：5D；指长比并不是一个造成宁夏汉族PCOS患者SHBG基因启动子(TAAAA)n多态性的重要指标。

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中英文缩略词表

目录

第一部分 宁夏汉族多囊卵巢综合征患者的临床资料分析

前 言

材料与方法

结 果

讨 论

结 论

参考文献

第二部分 雄激素受体AR基因多态性与多囊卵巢综合的关联性研究

前 言

材料与方法

结 果

讨 论

结 论

参考文献

第三部分 SHBG基因多态性与多囊卵巢综合的关联性研究

前 言

材料与方法

结 果

讨 论

结 论

参考文献

第四部分 指长比与多囊卵巢综合征的相关性研究

前 言

材料与方法

结 果

讨 论

结 论

参考文献

综 述

致谢

攻读硕士学位期间发表论文

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