烟草中乙烯受体NTHK2全长基因的克隆和功能研究

摘要

该室克隆的两组分信号系统基因NTHK1为探针,筛选烟草cDNA文库,获得了一个同源基因NTHK2.我们应用5'-RACE方法克隆到NTHK2的全长cDNA.Southern分析表明烟草基因组中含有较低拷贝数的NTHK2基因.应用RT-PCR方法研究了NTHK2的表达情况.当对烟草叶片进行伤害处理和对烟草幼苗进行PEG、Cacl<,2>、冷和乙烯处理时,NTHK2的表达受诱导.为了深入了解NTHK2的生理功能,我们进行了转基因的研究.利用酵母双杂交技术从烟草的cDNA表达文库中筛到30多个可能与NTHK1相互作用的基因.对它们进行了分类分析,发现NTHK1可能参与多种信号传递途径,包括细胞生长发育、渗透胁迫、氧化逆境、光信号、蛋白质的合成及其它未知的信号传递途径.

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缩略词

引言

1.蛋白磷酸化与两组分信号系统

2.酵母的渗透调节两组分信号系统

3.植物的乙烯信号传递途径

4.植物其它两组分信号系统基因

5.乙烯信号传递与植物的逆境胁迫反应

6.结语

1材料与方法

1.1材料处理

1.2烟草总RNA的提取

1.3-链cDNA的合成

1.4 5‘-RACE

1.5序列同源性比较与分析

2.结果与分析

2.1NTHK2基因的克隆

2.2NTHK2基因的结构

一.NTHK2的Southern研究

1.材料与方法

2.结果与分析

二.NTHK2的表达模式-RT-PCR

1材料与方法

2.结果与分析

第三部分NTHK2的转基因研究

1.材料与方法

1.1植物双元表达载体构建

1.2 NTHK2基因转化拟南芥

2结果与分析

第四部分酵母双杂交鉴定与NTHK1相互作用的下游基因酵母双杂交的原理

1.材料和方法

1.1材料的处理

2.结果与分析

讨论

1.1烟草NTHK2全长基因的克隆

1.2 NTHK2的Souther blot和RT-PCR

1.3 NTHK2的转基因研究

1.4酵母双杂交筛选与NTHK1相互作用的下游基因

1.5今后的研究设想

结论

参考文献

致谢

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