脂质体法转染小鼠体细胞的研究

摘要

转染效率低是脂质体转染法存在的主要问题，制约了它的广泛应用。本文以绿色荧光蛋白(GFP)基因为报告基因研究了影响脂质体法转染小鼠体细胞效率的因素及转染对小鼠体细胞的影响，以期提高脂质体转染效率，为转基因克隆打下基础。首先研究了脂质体量、质粒量和细胞在脂质体－质粒复合物中暴露时间对小鼠胎儿成纤维细胞(MFFC)的绿色荧光蛋白(GFP)转染效率的影响。在此优化的实验条件下，研究不同传代次数的MFFC对脂质体转染效率的影响及不同小鼠体细胞种类对脂质体转染效率的影响。接着，进行了细胞周期同步化方法的筛选并以筛选出的方法研究了细胞周期对脂质体转染效率的影响。

目录

关于学位论文原创性和使用授权的声明

1前言

1.1生产转基因动物的方法

1.2外源基因导入动物体细胞的方法

1.3脂质体转染法

1.4细胞周期同步的方法

1.5本研究的实验目的与实验内容

2材料与方法

2.1溶液的配制

2.2实验动物

2.3质粒的制备

2.4小鼠体细胞的培养

2.5 MFFC的G418毒性检测

2.6脂质体法转染小鼠体细胞

2.7细胞周期同步化方法

2.8流式细胞计量术(FACS)检测细胞周期

2.9膜联蛋白V(Annexin V)－FITC与PI检测细胞凋亡

2.10染色体倍性分析

2.11统计分析

3结果与分析

3.1脂质体量对转染效率的影响

3.2 DNA量对转染效率的影响

3.3脂质体－DNA复合物暴露时间对转染效率的影响

3.4 G418毒性检测

3.5细胞传代次数对转染效率的影响

3.6细胞种类对转染效率的影响

3.7细胞周期对转染效率的影响

3.8脂质体转染法对MFFC的影响

4讨论

4.1脂质体量、DNA量和暴露时间对转染效率的影响

4.2细胞传代次数对脂质体转染效率的影响

4.3细胞种类对脂质体转染效率的影响

4.4 MFFC的G418毒性检测

4.5细胞周期对转染效率的影响

4.6脂质体转染对MFFC的影响

5结论

参考文献

图版及图版说明

致谢

作者简介