论文说明:英文缩略词
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摘要
1前言
1.1精氨酸激酶的生物学功能
1.2精氨酸激酶的分子生物学
1.3精氨酸激酶表达调控研究
1.4精氨酸激酶底物结合协同作用
1.5精氨酸激酶的折叠和去折叠
1.5.1蛋白质折叠的主要假说和模型
1.5.2蛋白质的体外折叠
1.5.3蛋白质去折叠的研究
1.6精氨酸激酶的晶体结构和空间结构模拟
1.6.1精氨酸激酶的晶体结构
1.6.2精氨酸激酶的空间结构模拟
1.7本研究的科学意义
2材料与方法
2.1实验材料
2.1.1生物材料
2.1.2菌株与质粒
2.1.3酶及生化试剂
2.1.4 PCR引物
2.2实验方法
2.2.1总RNA的提取
2.2.2 cDNA第一条链的合成
2.2.3 cDNA纯化
2.2.4 cDNA进行末端加尾
2.2.5精氨酸激酶基因全长的克隆
2.2.6精氨酸激酶的原核表达
2.7原核表达精氨酸激酶的纯化
2.7.1蛋白质含量的测定
2.7.2酶活力测定方法
2.7.3原核表达活性AK的纯化
2.8.精氨酸激酶关键位点的定点突变
2.9突变精氨酸激酶的原核表达和分离纯化(亲和层析)
2.10精氨酸激酶的酶学性质的研究
2.10.1精氨酸激酶的动力学特性
2.11.1精氨酸激酶等电点及荧光发射光谱测定
2.11.2精氨酸激酶外源荧光光谱测定
2.12精氨酸激酶的热变性和热聚沉
2.13盐酸胍诱导的精氨酸激酶的失活
2.14盐酸胍浓度依赖的精氨酸激酶折叠和去折叠
2.14.1精氨酸激酶折叠和去折叠材料的处理
2.14.2精氨酸激酶折叠和去折叠的光谱学试验
2.14.3参数A和相图法对AK光谱学的数据分析
2.15精氨酸激酶表达调控模式研究
2.15.1精氨酸激酶启动子的获得
2.15.2精氨酸激酶表达调控模式研究
2.15.3 Northern杂交分析
3.结果与分析
3.1精氨酸激酶基因的克隆及表达分析
3.1.1精氨酸激酶基因的克隆
3.1.2精氨酸激酶基因的序列分析
3.1.3精氨酸激酶原核表达、纯化及酶学性质研究
3.2原核表达精氨酸激酶酶学性质研究
3.2.1原核表达精氨酸激酶等电点及荧光发射光谱测定
3.2.2原核表达精氨酸激酶的动力学特征
3.3精氨酸激酶的定点突变、原核表达、纯化及酶学性质研究
3.3.1精氨酸激酶的定点突变、原核表达和纯化
3.3.2精氨酸激酶底物结合协同性有关的氨基酸位点的研究
3.3.3精氨酸激酶基因的表达调控分析
4讨论
4.1精氨酸激酶的基因序列分析
4.2精氨酸激酶的原核表达和纯化
4.3突变对底物结合协同性的影响及其作用机制
4.4突变对酶空间结构、稳定性的影响及其作用机制
4.5精氨酸激酶的表达调控研究
4.6进一步研究方向
5结论
参考文献
致谢
攻读硕士学位期间已发表的和待发表的论文