山羊DQA1、DQB1、DQA2基因外显子2多态性及与线虫抗性、免疫性状的相关研究

摘要

主要组织相容性复合物(MHC)是一群紧密连锁高度多态的基因，编码主要组织相容性抗原，在脊椎动物机体的免疫系统中具有重要作用，因此MHC常作为家畜抗病育种的候选基因。本研究采用PCR-SSCP、PCR-RFLP技术对莱芜黑山羊、波尔山羊、鲁波山羊3个山羊种群共175只个体的DQA1、DQA2、DQB1基因外显子2进行了遗传多态性分析，并对DQB1、DQA2基因多态性与线虫抗性、免疫性状的相关性进行了研究，其结果如下： 1.采用PCR-SSCP技术对DQA1基因外显子2多态性进行了分析，共检测到8种基因型，并对其纯合子进行了测序，检测到23处碱基突变。 2.对人类、山羊、绵羊、牛DQA1基因外显子2核苷酸序列进行同源性比较，结果发现同源性很高。 3.采用PCR-RFLP技术对莱芜黑山羊、鲁波山羊和波尔山羊DQA2、DQB1基因外显子2进行多态性分析，共检测到4种DQA2基因外显子2基因型，7种DQB1基因外显子2基因型。通过酶切图谱和测序分析表明，DQA2基因外显子2的第77、79、80和169位的碱基表现出多态性，DQB1基因外显子2的第24、151位的碱基表现出多态性。 4.应用SAS8.0软件GLM程序对DQA2、DQB1基因不同基因型与线虫抗性进行了相关分析，在DQA2基因中，基因型与线虫EPG有一定的相关性，但没有达到显著水平(P＞0.05)。在DQBl基因中，BC、DD基因型的线虫EPG显著低于BB基因型(P＜0.05)，在种群内的分析中发现，鲁波山羊中，BC基因型的线虫EPG显著低于AC基因型(P＜0.05)。其它基因型与线虫EPG也有一定的相关性，但没有达到显著水平(P＞0.05)。 5.应用SAS8.0软件GLM程序对DQA2、DQB1基因不同基因型与免疫性状进行了相关分析，在DQA2基因中，莱芜黑山羊中AB基因型的RBC低于BB、BC基因型(P＞0.05)，而MCH高于BB、BC基因型，但没有达到显著水平(P＞0.05)：BC基因型的W-LCR高于AB、BB基因型(P＞0.05)，而W-SCC低于AB、BB基因型，但没有达到显著水平(P＞0.05)。鲁波山羊中AB基因型的RBC显著高于BB基因型(P＜0.05)，高于BC基因型(P＞0.05)；AB基因型的WBC显著高于BC基因型(P＜0.05)，高于BB基因型(P＞0.05)；AB基因型的HCT显著高于BB、BC基因型(P＜0.05)；BC基因型的W-LCR显著高于BB基因型(P＜0.05)，高于AB基因型(P＞0.05)。在DQB1基因中，莱芜黑山羊中BC基因型的W-SCR显著高于AC、CC基因型(P＜0.05)，W-LCR显著低于CC基因型(P＜0.05)，W-LCC低于AC、CC基因型，但差异不显著(P＞0.05)；波尔山羊中BC基因型的W-LCC低于AA、AB基因型，但差异不显著(P＞0.05)；鲁波山羊中BC、AC基因型的W-LCC显著低于AA基因型(P＜0.05)。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英文缩略词

声明

1引言

1.1遗传因素对动物感染寄生虫的影响

1.2关于山羊消化道线虫病

1.3 MHC及与家畜抗病性的相关性研究

1.4绵羊和山羊MHC的研究进展

1.5本研究的目的与意义

2材料与方法

2.1实验材料

2.2主要仪器设备

2.3工具酶及主要试剂

2.4缓冲液及主要试剂配制

2.5实验方法

2.5.1虫卵漂浮法、三期幼虫培养及分离法、粪检虫卵计数法

2.5.2基因组DNA的提取、纯化DNA基因组、DNA样品浓度测定

2.5.3山羊DQA1基因外显子2的PCR-SSCP分析

2.5.4山羊DQB1、DQA2基因的PCR-RFLP分析

2.5.5山羊DQA1、DQB1、DQA2基因的克隆测序与分析

2.6数据统计分析

2.6.1基因频率和基因型频率的计算

2.6.2基因和基因型频率的差异显著性检验（x2独立性检验）

2.6.3群体Hardy-Weinberg平衡状态的检测

2.6.4基因杂合度、有效等位基因数以及多态信息含量的计算

2.6.5 DQA2、DQB1基因多态性与线虫抗性、免疫性状的相关分析

3结果与分析

3.1山羊全血中基因组DNA的提取

3.2山羊DQA1基因遗传多态性分析

3.3山羊DQA2、DQB1基因遗传多态性分析

3.4山羊DQA2、DQB1基因遗传多态性与线虫抗性的相关分析

3.5山羊DQA2、DQB1基因多态性与免疫性状的相关分析

4讨论

4.1 PCR-SSCP与PCR-RFLP分析

4.2关于粪检虫卵实验结果的分析

4.3关于MHC-DQA1、DQA2、DQB1基因多态性

4.4 Hardy-Weinberg平衡状态分析

4.5关于DQA2、DQB1基因多态性与线虫抗性的关系分析

4.6关于DQA2、DQB1基因多态性与免疫性状的关系分析

5结论

主要参考文献

附录：测序结果

致谢

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