鸡传染性支气管炎病毒(793/B)M基因与截短M基因的克隆测序、原核表达及鉴定

摘要

鸡传染性支气管炎(Infectious Bronchitis，IB)是由传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus，IBV)引起的一种急性高度接触性传染病。自30年代在美国爆发以来，现已成为世界各地流行的重要禽病。IBV是单股RNA病毒，该病毒基因可因点突变和重组而发生变异，故传染性支气管炎病毒血清型较多。已知的血清型有以侵害呼吸道为主的Conn、Iowa97、JMK、Florida、Arkansas99等和以侵害肾脏为主的M41、Holte、Gray、Australia

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声明

第一部分文献综述 鸡传染性支气管炎病毒793／B的研究进展

1.IBV分类

2.IBV基因组

3.IBV病毒粒子结构

4.IBV主要结构蛋白及功能

4.1纤突蛋白(S蛋白或E1)

4.2包膜蛋白(基质蛋白或M蛋白)

4.3核衣壳蛋白(N蛋白)

4.4其它蛋白

5.IBV复制

6.IBV血清型研究

6.1国外对IBV的分型研究

6.2国内对IBV分型的研究

6.3血清抗体分析

7.IBV RNA重组与基因工程苗

8.IBV 793／B特性

8.1分子生物学特性

8.2 793／B致病性

8.3流行病学

8.4诊断

8.5防制及存在的问题

9.研究的意义

第二部分研究内容 第一章鸡传染性支气管炎病毒变异株(793／B)M基因的克隆与序列分析

1.材料与方法

1.1病毒株和菌株

1.2器材和试剂

1.3 SPF鸡胚

1.4引物

1.5病毒的增殖与浓缩

1.6病毒基因组RNA的提取

1.7 RT-PCR

1.8 PCR产物的克隆和序列测定

1.9序列分析

2.结果

2.1 RT-PCR扩增结果

2.2重组质粒的鉴定

2.3测序结果及核苷酸、氨基酸序列比较

2.4同源性分析

3.讨论

第二部分研究内容 第二章IBV(793／B)M基因与2种截短M基因原核表达及鉴定

1.材料和方法

1.1质粒及菌种

1.2主要试剂和器材

1.3实验动物

1.4鼠抗IBV(793／B)血清的制备

1.5引物的设计与合成

1.6 pGEX6p-M、pGEX6p-M1和pGEX6p-M2原核表达质粒的构建

1.7 GST-M1、GST-M2和GST-N重组蛋白的诱导表达

1.8 Western blot鉴定

2.结果

2.1 pGEX6p-M、pGEX6p-M1和pGEX6p-M2原核表达质粒的构建及鉴定

2.2 GST-M、GST-M1和GST-M2重组蛋白的诱导

2.3 Western blot鉴定

3.讨论

结论

参考文献

附录

致谢

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