卵泡大小对山羊卵母细胞皮质颗粒分布与迁移的影响

摘要

胚胎工程技术研究和开发需要大量高质量的成熟卵母细胞，但利用卵巢卵母细胞经体外培养而获取的成熟卵母细胞质量远不如体内成熟卵母细胞，其原因一般认为是胞质成熟不充分。具有较好发育潜力的体内成熟卵母细胞的可识别特征仍然不是很清楚。近年来，卵母细胞成熟过程中皮质颗粒（CGs）迁移和分布的变化作为胞质成熟的判定指标为越来越多的研究者接受。虽然小鼠、猪卵母细胞内皮质颗粒的迁移和分布研究较多，但是对于山羊卵母细胞皮质颗粒的迁移和分布研究很少，而利用共聚焦显微镜研究进行详细研究的更少。因此，本文以山羊卵母细胞为实验材料，利用免疫荧光和共聚焦显微镜技术，详细研究了不同直径山羊卵泡中的卵母细胞在成熟过程中皮质颗粒的迁移和分布情况。这对于深入了解卵母细胞内皮质颗粒变化，探讨卵母细胞成熟机理，改善体外培养条件，提高体外成熟卵母细胞质量具有重要意义。结果表明：
　　 1.不同直径卵泡中卵母细胞核成熟能力不同：≤0.5mm直径卵泡中卵母细胞只有少数能够恢复减数分裂但只能发育到MⅠ期；0.8-1.2mm直径卵泡中卵母细胞绝大多数能恢复减数分裂，但只有27％左右的卵母细胞能发育到MⅡ期；1.5-2.5mm和3-5mm直径卵泡卵母细胞可恢复减数分裂并发育到MⅡ期（24 h时MⅡ期比率分别为63.4％和82.4％）。
　　 2.山羊卵母细胞皮质颗粒分布情况可分为未迁移，部分迁移和完全迁移三类。迁移方式为皮质区附近的皮质颗粒先聚集到质膜下，在皮质区附近形成不连续的环，然后其它皮质颗粒逐渐移向皮质区，最后在质膜下形成一个单层。
　　 3.对于不同直径卵泡中获得的新鲜卵母细胞，皮质颗粒迁移程度随着卵泡直径增加而增大。其中腔前卵泡和早期有腔卵泡卵母细胞内皮质颗粒大部分未发生迁移，而直径较大卵泡中的卵母细胞内皮质颗粒分布以部分迁移为主。
　　 4.腔前卵泡和早期有腔卵泡卵母细胞的生发泡附近有一个环状皮质颗粒富集区，可能是皮质颗粒正在合成的部位。
　　 5.在体外培养成熟过程中，不同直径卵泡卵母细胞内皮质颗粒随着培养时间延长逐渐发生迁移，随着卵泡直径增大迁移更加完全。培养24h后，≤0.5mm直径卵泡卵母细胞皮质颗粒完全迁移的比例只有4.4％，0.8-1.2mm直径卵泡卵母细胞皮质颗粒完全迁移的比例增加到54.8％；1.5-2.5 mm直径卵泡卵母细胞皮质颗粒完全迁移的比例增加到79.0％；3=5 mm直径卵泡卵母细胞皮质颗粒完全迁移的比例增加到97.0％。大直径卵泡卵母细胞的皮质颗粒迁移，不论从时间还是程度上都要早于和大于小卵泡卵母细胞。
　　 6、山羊卵母细胞存在无皮质颗粒区，位于染色体上方附近的质膜，约占卵周长的10-15％，从MⅠ期开始出现，直到MⅡ期仍然存在。
　　 7、皮质颗粒的迁移与核成熟是分离的两个过程，皮质颗粒的迁移更可能反映的是胞质成熟。即使处于同一核成熟阶段的卵母细胞内皮质颗粒也会有未迁移和迁移两种类型。

目录

文摘

英文文摘

符号说明

1 引言

1.1 卵母细胞成熟

1.1.1 卵母细胞的核成熟

1.1.2 卵母细胞的细胞质成熟

1.1.3 不同直径卵泡中卵母细胞的成熟

1.1.4 卵母细胞胞质成熟质量判断标准

1.2 皮质颗粒行为研究进展

1.2.1 皮质颗粒形态、来源及组成

1.2.2 皮质颗粒的研究方法

1.2.3 卵母细胞发生过程中的皮质颗粒

1.2.4 不同物种卵母细胞成熟期间皮质颗粒迁移和重新分布

1.2.5 无皮质颗粒区相关知识

1.2.6 皮质颗粒分布与变化的影响因素

1.2.7 皮质反应

1.3 本实验主要研究内容

2 材料与方法

2.1 山羊卵泡获取

2.1.1 有腔卵泡的剥离

2.1.2 腔前卵泡的收集

2.1.3 卵泡直径的测量

2.2 COCs的获得

2.3 山羊卵母细胞体外培养

2.4 皮质颗粒染色

2.5 卵母细胞核成熟的判定

2.6 激光扫描共聚焦显微镜技术

2.7 数据分析

3 结果与分析

3.1 山羊卵母细胞皮质颗粒的形态学描述

3.2 早期卵泡生长过程中卵母细胞皮质颗粒变化

3.3 卵母细胞体外培养8小时核进程和皮质颗粒分布

3.4 卵母细胞体外培养12小时核进程和皮质颗粒分布

3.5 卵母细胞体外培养24小时核进程和皮质颗粒分布

4 讨论

4.1 山羊卵泡生长过程中卵母细胞皮质颗粒的合成和变化分析

4.2 山羊卵母细胞成熟时期的皮质颗粒迁移过程

4.3 无皮质颗粒区的分析

4.4 卵泡直径和皮质颗粒迁移能力

5.结论

6.参考文献

附录：图版及图版说明

致谢

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