H9N2亚型禽流感山东分离株的抗原变异及其对小白鼠致病性研究

摘要

禽流感是由A 型流感病毒引起的禽类传染病，临床表现为呼吸道感染，产蛋量下降，头颈水肿和腹泻。H9 亚型禽流感为低致病力禽流感，能引起少量死亡或不死亡，表现为生长障碍和产蛋量下降。禽流感病毒变异频繁，传播速度快，给疫情的防控造成巨大的困难，使世界养禽业遭受巨大损失。研究并掌握禽流感的生物学特性和遗传进化规律，对有效的防控禽流感疫情有重要意义。为了掌握我国H9 亚型禽流感的变异情况和流行规律，本研究从生物学特性和分子水平上对2009年从山东不同地区的规模化肉鸡场中分离到6 株H9N2 亚型流感病毒进行生物学特性、免疫相关性、分子遗传规律、对哺乳动物的致病性和对鸡的免疫保护性等方面的研究。
　　 通过血凝特性的测定、鸡胚致病力的测定等方法对6 株禽流感H9N2 亚型毒株的致病力进行分析和比较。结果表明：本试验分离到的2009年我国山东地区的这6 株禽流感H9N2 亚型毒株属于低致病性禽流感病毒，其HA 效价在26～29之间，EID50 在10-7.75/0.1mL～10-9.25/0.1mL之间，TCID50 在10-8.00/0.1mL～10-8.50/0.1mL之间，6 株H9N2 禽流感病毒的EID50和TCID50数值相差不大，这说明2009年分离的H9 流感病毒在鸡胚和哺乳动物细胞上的适应性比较接近。用有限稀释法对这6 株病毒进行纯化，制备单因子血清，进行双交叉HI 试验，从而分析它们的抗原相关性。不同时期和不同地区分离株的抗原性有所差异但没有发生根本性变化，试验选用的6 株病毒的抗原相关性在0.91～1.02之间，同一病毒的单因子血清对该病毒的HI 效价较高；6 株病毒之间的差异性不大。
　　 从分子水平上分别研究了6 株AIV H9N2分离株各基因片段的基因类型。对6 株H9N2 病毒的8个基因片段(PB2，PB1，PA，HA，NP，NA，M和NS)分别进行系统进化分析，作出系统进化树。HA基因进化树中，6 株病毒存在同一个进化位置，都属于CK/SH/Y2/2008-like谱系，NA，NP，M，NS，PB1，PA基因进化树和HA基因进化树相同。然而，在PB2基因进化树中，6 株病毒可以分为两个不同的进化分支，其中CK/SD/SG2/2009、CK/SD/WL/2009 属于CK/SH/Y2/2008-like谱系，另外四株病毒CK/SD/PD/2009、CK/SD/HY/2009、CK/SD/SG1/2009、CK/SD/FX/2009 却属于CK/SH/F/98-like谱系。因此6 株病毒可以分为两个基因型：CK/SD/SG2/2009、CK/SD/WL/2009 属于一个基因型，类似于CK/SH/Y2/2008-like谱系；CK/SD/PD/2009、CK/SD/HY/2009、CK/SD/SG1/2009、CK/SD/FX/2009是CK/SH/Y2/2008-like和CK/SH/F/98-like 重组而来。为阐明H9N2 流感病毒对哺乳动物致病性，分别以106EID50 剂量攻毒6周龄BABL/c 雌性小鼠，6 株病毒都能在小鼠肺脏中复制，而且两株病毒能在攻毒7天后引起小鼠死亡。该试验结果具有重要公共卫生意义。
　　 以CK/SD/SG2/2009和某公司的鸡新城疫禽流感二联灭活疫苗（以下简称：新流疫苗）分别免疫28天的SPF 试验鸡，用本试验分离株CK/SD/SG2/2009 攻毒，两种疫苗都有保护性，但不同的部分分离的病毒滴度不同。本研究中我国山东分离到的H9N2 亚型禽流感病毒不存在明显的抗原性差异，但是疫苗也不能产生完全的保护，这也可能和疫苗不能诱导完全的免疫保护有关。因此，合理的选择抗原针对性强的疫苗株非常重要，最好是选择和当前流行毒株抗原性一致的病毒株作为疫苗株。同时要制定合理的免疫程序，这样可以提高免疫后的抗体水平，更好的发挥疫苗的免疫保护作用。

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论文说明:缩略词

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1 引言

2 材料和方法

3 结果与分析

4 讨论

5 结论

6 参考文献

8 致谢

9 作者简介及论文发表情况