饲料中黄曲霉毒素B1监测及其对蛋鸡肝脏脂类代谢和抗氧化功能的影响

摘要

课题调研了我国饲料原料中黄曲霉毒素B1及玉米中各种霉菌毒素的污染情况，并研究了黄曲霉毒素B1对蛋鸡肝脏脂类代谢和抗氧化功能等方面的影响，探讨其影响途径与机制，对生产提供一定的指导意义。
　　 从全国各省市采集84份饲料原料，利用ELISA原理，检测其中AFB1的含量。结果发现，饲料原料中AFB1的检出率高达96.4％，但超标率为0；饲料样品中AFB1含量≤20μg/kg的比例为97.62％。以上结果表明，我国饲料普遍受到AFB1的污染，但并非所检测饲料原料的主要问题；可以考虑把国标规定的饲料原料中AFB1的允许限量50μg/kg及30μg/kg改为20μg/kg，使饲料原料和产品的限量标准尽可能一致，以利于国家的监管及饲料企业组织生产。
　　 从全国各省市具有代表性的饲料企业中，采集36份玉米饲料，利用ELISA原理，检测其中的AFB1、ZEN、DON、OTA及FB1的含量。结果表明，DON、ZEN、AFB1和FB1的检出率分别为100％、97.14％、91.67和88.89％，OTA检出率为0；FB1和OTA没有超标，DON、FB1和ZEN的超标率分别33.33％、30.56％和14.29％，污染比较严重；ZEN和DON、AFB1和FB1的相关系数分别为0.512和0.489，两者均有显著的相关关系。
　　 分离并培养3日龄雌性海兰褐雏鸡肝细胞，培养48h后开始正式试验。试验组为含0.05μg/mLAFB1的基础培养液，处理24h。结果表明，AFB1处理显著增加了细胞上清液中GPT、GOT以及LDH的活性；显著降低了肝细胞脂肪代谢相关基因FAS、ACC、ME、LXR、ApoB100、MTP及L-CPT1mRNA的表达，对SREBP-1cmRNA的表达无影响；显著降低了肝细胞中Mn-SOD、Cu-Zn-SOD、GPX-Px和CATmRNA的表达；显著增加了MDA的含量，对8-OHdG和蛋白质羰基的含量无显著影响；对内质网应激相关基因GRP78及GRP94mRNA的表达及GRP78蛋白水平的表达无显著影响。以上结果揭示AFB1使肝细胞受到一定程度的损伤，是通过LXRα信号通路而可能没有通过SREBP-1c信号通路来降低肝细胞脂肪从头合成的，并降低抗氧化功能及导致脂质过氧化损伤。
　　 分离并培养3日龄雌性海兰褐雏鸡肝细胞，培养48h后开始正式试验，分为4个处理，分别为对照、AFB1(0.5μg/mL)、ZEN(10μg/mL)及AFB1加ZEN，处理24h。结果表明，AFB1和ZEN对肝细胞脂类从头合成相关基因FAS和ACC、脂类运输相关基因apoB100、脂类调控因子LXR及抗氧化物酶Mn-SOD和Cu-Zn-SODmRNA的表达存在着一定的颉颃效应，但对抗氧化物酶GPH-PxmRNA表达存在着一定的亚加性效应。
　　 选取69周龄产蛋率和体重相近的健康蛋鸡16羽，标准笼养，随机等分为2组，试验组按55μg/kg体重的剂量每日14:00静脉注射AFB1，对照组注射同剂量的DMSO，自由采食和饮水，连续注射7d后，分别于空腹状态下在8:00取样。结果表明，注射AFB1后，平均产蛋率显著下降，体增重、平均采食量及肝脏发育指数无变化；血清中TG的含量显著下降(P<0.01)；肝脏中L-CPT1mRNA的表达显著升高(P<0.05)，FAS、ACC、ME、SREBP-1c、LXR、MTP、ApoB100及VLDL-ⅡmRNA的表达无显著差异，肝脏中T-SOD、CAT和GSH-PX的活性及氧化损伤产物蛋白质羰基、丙二醛和8-OHdG的含量均无差异。以上结果揭示，黄曲霉毒素B1对肝脏脂类的从头合成没有影响，可能是通过降低脂类的运输、增加脂肪酸的氧化及氧化损伤来降低血浆甘油三酯水平的。