猪源H1N1流感病毒在山东猪群中的检测及其气源性传播特点

摘要

猪源甲型H1N1流感病毒自从被认定是1918年流感大流行的病原以后，该病毒就已被人们所重视，2009年全球范围内流行的猪源性新型甲型H1N1流感再一次使人们的目光聚焦于此。通过对一些地区养猪场内猪群的检测，也发现部分地区的猪群中确实存在新型甲型H1N1流感病毒的传播。加强对人群、猪群中甲流的检测和防控工作，具有非常重要的公共卫生学意义。
　　 为了深入了解猪源性甲型H1N1病毒在山东省内猪群中存在和流行的情况，本实验在山东省内九个地市的多个养猪场进行抽样检测，使用AGI-30分别采集猪圈内、外空气样品，经过处理后使用实时荧光定量RT-PCR技术检测样品中猪源性甲型H1N1病毒的含量。猪舍内一共采集了157个空气样品，通过对空气样品的采集、处理和鉴定，其中41个样品为阳性，各个地区间舍内空气样品的阳性率为5.0％-67.0％，德州地区的阳性率最高。舍内空气样品中病毒拷贝数含量最高的猪场在德州，病毒拷贝数高达6.72log10 copies/m3 air。舍外的37份空气样品中检出3份阳性。
　　 2011年初，山东省潍坊市某地的部分养猪场相继出现类似流感症状的呼吸道疫病，通过对几个发病场的猪群的鼻咽棉拭子和组织病料进行了病毒的分离鉴定，最终在潍坊某养猪场采集的鼻咽棉拭子样品中得到一株流感分离株wfc3。经鉴定可以确定该株病毒为猪源性甲型H1N1流感病毒。该病毒的TCID50约为1.02×10-6/mL。
　　 山东省潍坊市某地的该次疫情传播速度快、波及范围较广，这些传播特点与该病毒的主要传播途径有直接的关系。因此，本实验建立气溶胶传染模型，旨在验证该株病毒在实验条件下气源性传播特点。在传染模型中，猪源性甲型H1N1流感病毒分离株wfc3能够造成气溶胶感染组实验猪的感染，但感染率比直接接触组低。研究表明，该病毒分离株具有形成病毒气溶胶的能力，在实验条件下能够引起气源性感染。

目录

声明

课题资助

略词说明

摘要

1 前言

1．1 猪源甲型H1N1流感病原

1．1．1 猪源甲型H1N1流感研究进展

1．1．2 猪源甲型H1N1流感病毒的结构

1．1．3 猪源甲型H1N1流感病毒蛋白质结构与功能

1．1．4 流感病毒的理化特点

1．1．5 甲型流感病毒的复制和变异

1．1．6 猪源甲型H1N1流感的流行和传播

1．1．7 猪源甲型H1N1流感的诊断方法

1．1．8 猪源甲型H1N1流感的公共卫生学意义

1．2 病毒气溶胶

1．2．1 气溶胶的概念

1．2．2 病毒气溶胶的产生和传播

1．2．3 病毒气溶胶的危害

1．2．4 气溶胶采样原理和仪器

1．2．5 病毒气溶胶的采集和检测

1．3 实时荧光定量PCR

2 研究目的与意义

3 材料与方法

3．1 材料

3．1．1 采样猪场

3．1．2 病料的采集

3．1．3 标准阳性血清和抗原

3．1．4 细胞、鸡胚和实验动物

3．1．5 引物和探针

3．1．6 主要试剂及配制方法

3．1．7 主要仪器设备

3．2 方法

3．2．1 猪场内空气样品的采集

3．2．2 引物探针的合成

3．2．3 标准品的制备

3．2．4 空气样品的处理

3．2．5 鼻咽拭子和病料样品的处理

3．2．6 病毒的分离纯化

3．2．7 病毒亚型的鉴定

3．2．8 病毒TCID50的测定

3．2．9 透射电镜下观察病毒形态

3．2．10 病毒的扩增

3．2．11 新型猪源H1N1流感病毒气溶胶传染模型的建立

3．2．12 隔离器中病毒气溶胶浓度的测定

3．2．13 实验猪感染和排毒情况的检测

4 结果

4．1 标准品制备结果

4．2 猪舍内、外空气样品的检测结果

4．3 荧光定量PCR的检测结果

4．4 病毒分离鉴定结果

4．5 病毒TCID50测定结果

3．6 透射电镜下病毒形态

4．7 空气样品的检测结果

4．8 传播模型中动物排毒检测和血清学检测结果

5 讨论

6 结论

参考文献

致谢

硕士期间发表的文章